3784496409

Ćwiczenie 4 Cel ćwiczenia:

badanie kinetyki procesu wzrostu szczepu i biosyntezy makrolidu takrolimus w hodowli wgłębnej szczepu S. tsukubaensis na podłożu testowym, obliczenie specyficznej szybkości wzrostu szczepu, optymalizacja procesu biotechnologicznego poprzez określenie wpływu zmiany skali prowadzenia procesu.

Czynności wykonywane przez podgrupę ćwiczeniowa:

-    oznaczenie wydajności wzrostu hodowli dla 2 (lub 3) z 6 próbek pobranych w czasie pracy fermentora (uwaga: dokładnie opisywać próbki, identyfikując czas ich pobrania z fermentora)

-    oznaczenie metodą RP HPLC zawartości tacrolimusu w tych samych próbkach, dla których wyznaczana była wydajność wzrostu szczepu

-    oznaczenie stężenia glukozy (źródło węgla) w tych samych próbkach, dla których wyznaczana była wydajność wzrostu szczepu

Uwaga: eksperymenty prowadzimy oddzielnie dla każdej próbki pobieranej podczas pracy fermentora!

Zawartości każdej z kolb dokładnie wymieszać (uwaga na opis kolbek!). Odmierzyć cylindrem do kolb Erlenmayera o pojemności lOOcm³ próbki o objętości równej 40cm³, przeznaczone do izolacji makrolidu lacrolimus. Następnie dokładnie oznaczyć objętości pozostałych próbek, wykorzystywanych do wyznaczenia wydajności przyrostu biomasy.

Metodyka oznaczeń:

Wyznaczanie wydajności przyrostu biomasy

Po oznaczeniu objętości pozostałych próbek przesączyć je przez sączki bibułowe na lejku Buchnera lub odwirować. Oznaczyć masy sączone oraz procenty suchych mas na wagosuszarce dla badanych próbek. Wyliczyć wydajność wzrostu hodowli wyrażoną w gramach s.m./L.

Uwaga!: procedurę powtórzyć dla każdej z badanych próbek.

Izolacja makrolidu lacrolimus

Kolbki Erlenmajera z próbkami o objętości równej 40 cm³ umieścić na 10 minut w łaźni ultradźwiękowej. Następnie dodać po 40 cm³ acetonu i umieścić je na mieszadle magnetycznym na 30 minut. Zawartości kolbek przesączyć pod zmniejszonym ciśnieniem przez warstwę ziemi okrzemkowej (o grubości około lcm) umieszczonej na filtrze Shotta.