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FABRICATION DU GEL.

Un gel d'acrylamide est coulć sur une lamę de microscope dc la faęon suivantc : une feuille de film Gel Bond est placee, face hydrophobe au-dessus, sur une plaque de verre; sur cette feuille sont dćposees, parallclement au grand axc de la lamę, deux bandes de plastique (30x80 mm) dont 1’epaisseur (0,5 mm) va correspondre a 1'epaisseur du gel. Une lamę dc microscope, Irailee prćalablement au Silane est dćposćc sur ccs bandes de plasiique. L'espace entre la lamc et le film Gel Bond est alors rempli avec une solution d'acrylamide (750 j.d d'eau distillee, 30 jil Temed (0,02%), 180 fil persulfate (0,25%), 50 Servalyt 4.9, 180 jd acrylamide (4,75 g acrylamide + 0,25 g Bisacrylamidc/10 ml H20). La polymerisation du gol s'eHectue en 30 mn.

EXTRACTION DU CONTENU DU POLLEN.

Lcs gratns de pollen, isoles sous loupe binoculaire, sont ecrasćs dans 10 \il de solution (Ac. ascorbiquc 0,01 %, cystćine 0,01 %, uree 2M. ampholyle 2,4 1 %) entre 2 lanies de microscope. Des petits carres de papier filtre (0,5 mm de cótć) sont imbibes de ce broyat et deposes sur le gel du cótć anodique : une dizaine d’ćchan-tillons peuvent etre deposes en ligne tous les 0,5 cm.

CONDUITE DE L ELECTROFOCALISATION.

Une bandę de papier filtre imbibee d'une solution (Ac. aspartique, Ac. gluta-mique 0,25 M) dćposee sur le gel d’acrylamide du cótć cathodique permettra le passage du courant electriąuc. Du cóte anodique, le mómc dispositif sera installe, mais le papier filtre sera imbibć d’unc solution de łysinę 0,025 M dans ćthylfcne-diamine 2,0 M. De fines electrodes de platine assurent le contact avec le redresseur (Fig. 1).

L'electrophorese commence k 100 volts puis, apres quelques minutes, est conduile k courant constant (approximativement 0,5 watls). Apres 20 minutes de migration, le voltage augmente brusquement (la conductivite de gel diminue), indiquant la fin dc la migration.

Les gels sonl ensuitc lixes dans 1’Acide trich!oracetique k 10% pendant 10 minutes puis colores soit au bleu de Coomassie, soit par la Methodc a 1'Argent pour les protćines; la revćlation des isozymes s'effccttie par ineubation dans les

substrats appropries.

CONCLUSION.

Cette methode est tres interessante a plusieurs niveaux :

—    elle est rapide: 1'ensemble de l'experimentation est realisable en quelques heures;

—    elle est plus reproductible que les autres methodes d’ćlectrophorese;

—    elle permet la comparaison entre plusieurs echaniillons qui sont soumis aux memes conditions de migration ;

—    elle est peu onereuse.

De plus cette Lechniąue pcut etre couplće par une electrophorese dans unc deuxiemc dimension avec des gels au SDS ; 1’utilisation de cette mćthode pour un grain de pollen permettra cFameliorer la connaissance sur la genetique des microgametophytes.

L'ćIectrofocalisalion des proteines de pollen a ćte misę au point par M. D.L. Mui.cahy, University of Massachusetts, Amherst 01003 (U.S.A.).