1588094235

Rys.2 Schemat przyrostu ilości amplifikowanego fragmentu DNA w kolejnych cyklach reakcji PCR; gwiazdką zaznaczono właściwy produkt reakcji.

Istotny przy planowaniu reakcji PCR jest dobór następujących parametrów:

1.    odpowiednie startery do reakcji PCR. Należy dobrać je tak, aby:

■    zawierały ok. 50% par GC,

■    nie tworzyły struktur typu spinki do włosów (ang. hairpin),

• nie zawierały fragmentów komplementarnych do drugiego startera,

■    temperatura topnienia wynosiła ok. 50-60°C;

2.    rodzaj polimerazy; najczęściej używa się polimerazy z Thermus aąuaticus - Taq polimeraza - lub innych termostabilnych polimeraz DNA, np. odznaczającej się większą wiernością kopiowania - polimerazę Pfu);

3.    warunków samej reakcji - temperatury, przebiegu poszczególnych cykli itp.

2. KLONOWANIE GENÓW

Termin „klonowanie” w odniesieniu do pojedynczego fragmentu DNA oznacza namnożenie określonego odcinka DNA w komórkach gospodarza, najczęściej Escherichia