2150626324

Zakład Biologii Molekularnej UMCS, wrzesień 2014

3.    Mieszaninę inkubować 30 min. w temp. 37°C, po czym dodać 15 pi bufom próbkowego do elektroforezy białek w warunkach denaturujących (SDS-PAGE) w celu zatrzymania reakcji (jeśli zachodzi taka potrzeba, próbki można pozostawić do kolejnych ćwiczeń w temperaturze -20°C).

4.    Przygotować 13,8 % żel poliakrylamidowy do elektroforezy białek w warunkach denaturujących (SDS-PAGE) według przepisu w załączniku do ćwiczeń.

5.    Próbki zawieszone w buforze próbkowym ogrzewać przez 3 minuty w temperaturze 90°C. Bezpośrednio po ogrzaniu nanosić na żel po 30 pl przygotowanych próbek. Rozdział prowadzić pod napięciem 150V tak długo, aż barwnik przesunie się do końca żelu separującego. Po rozdziale białka wybarwić błękitem Coomassie (patrz załącznik do ćwiczeń).

Interpretacja wyników

Określić, które z badanych inhibitorów hamują aktywność proteolityczną trombiny.

17