2906542733

130

K. KALETHA

ksymacji wynikający z zastąpienia wartości v i [A] odpowiednio przez v i [A] zależy od wartości liczbowej stosunku A[A]j/[A]i. Jeżeli długość przedziałów dzielących krzywą przebiegu reakcji jest tak dobrana, że A [A],/ /[A]i < 0,3, to błąd aproksymacji jest nieistotny (17). Uzyskane przy pomocy tego sposobu wyniki oznaczeń stałej Michaelisa i szybkości maksymalnej, przeprowadzonych na przykładzie konkretnych reakcji enzymatycznych (reakcja katalizowana przez AMP-aminohydrolazę mięśnia szkieletowego królika oraz przez kinazę pirogronianową z drożdży), dowiodły jego dużej użyteczności praktycznej ze względu na wysoką, porównywalną z uzyskiwaną w metodach opartych o wyznaczanie szybkości początkowych precyzję pomiaru. Praktycznie, na przykładzie reakcji katalizowanych przez dehydrogenazę mleczanową mięśnia szkieletowego królika oraz przez kwaśną fosfatazę bulwy ziemniaka sprawdzona została również użyteczność innego, opartego na analizie krzywej przebiegu reakcji enzymatycznej metodami regresji nieliniowej (11) sposobu wyznaczania parametrów kinetycznych reakcji, opublikowanego ostatnio w tym samym czasopiśmie (18).

II-2. Reakcje hamowane przez nagromadzający się produkt

Rozważania dotychczasowe ograniczały się do szczególnego, przedstawionego na schemacie 1 przypadku, w którym o reakcji enzymatycznej zakładano, że wytwarzany w trakcie jej przebiegu produkt nie wpływa hamująco na proces enzymatycznej katalizy. Rozpatrzmy teraz reakcję enzymatyczną przebiegającą wedle mechanizmu przedstawionego na schemacie 2:

Schemat 2