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THESE

Expression d'oncogenes et tumeurs mammatres : Etude clinique et dśvek>ppement d'un model

souris transgeniques pour v-Ha-ras en toxicologie.

Rśsumś

L‘expression de trois oncogenes (c-erbB-2_% ras, pS2) et d'un gene suppresseur de tumeur donnę lieu a une śtude de cas clinique et une etude expśrimentale ayant utilisś les transgśniques v-Ha-ras. Une quantification du nombre de copies de 1'oncogśne c-erbB-2& obtenue par amplification genique associee a un marquage froid des amplimśres a partir <tł carcinomes infiltrants. II semble exister une relation entre le nombre de copies du c-erbB-2 grade de la tumeur. Dans les memes lesions, rimmunohistochimie a montre que c-Ha-ras et, sont exprimśs surtout dans les lesions de haut grade. En revanche, pS2 est exprime surtout les Iśsions de faible grade, confirmant ainsi le pronostic favorable qui lui est associś. L'etud# oncogśnes et des protóines correspondantes peut apporter des ślśments pronostiques dani cancers mammaires de la femme.

Des souris transgśniques v-Ha-ras ont ete utilisees pour mettre en śvidence le potl cancerogene de produits chimiques. Des mśthodes de marquage de sondes et de revślation radioactifs (colorimśtrie et chimioluminescence) ont permis d'etablir que ces souris portek li transgśne ras et l expriment dans les organes hematopoiśtiques (ratę et thymus) ainsi que d rein et le foie. Le transgene est present a raison de 2 ou 3 copies par equivalent-genome. avons montre ensuite que le 2-butoxyśthanol administre par mini-pompe osmotique pendart jours (dose totale 10 mmol/kg), etait dśnue d'effets genotoxique et epigenśtique mesures pm 0 la mśthylation de l'ADN total, (ii) la móthylation du transgene v-Ha-ras et (iii) 1'absendi m formation d'adduits hydrophobes et hydrophiles sur 1'ADN. De plus, le 2-butoxyóthanol n'i Hi ihduit la formation de tumeurs chez ces souris. Ce modfele d'animaux transgeniques pourrail H utilisś comme test de criblage de substances potentiellement cancórogenes.

Mots clós : Oncogenes, tumeur mammaire, souris transgeniques v-Ha-ras, 2-butoxyetl mśthylation, adcTjit de l'ADN, effet śpigenśtique, gśnotoxicitś.

Title : Oncogene expression and breast carcinomas : Clinical study and development of a v-l transgenic mouse model in toxicology.

Summary :

We have investigated the expression of three oncogenes (c-erbS-2, ras, pS2) and one supp tumor gene (p53) in first, a clinical study, second, in an experimental one using the V‘H| transgenic mice.

Ouantification of copy number of c-erbB-2 oncogene has been obtained by gene amplification HlBB non-radioactive amplimer labelling on 29 mammary ductal infiltrating carcinomas. There w£mS apparent correlation between gene copy number and tumor grade. Immunohistochemistry ci same lesions have shown c-Ha-ras and p53 expression in high grade lesions. pS2 expressior^ associated to Iow grade lesions, which confirms the good prognosis associated to this pr Detection of oncogenes and encoded proteins may be of value for establishing a progno^H mammary carcinomas.

The v-Ha-ras transgenic mice have been used to evidence the carcinogenic potential of che Using non-radk>active labelling and detection methods (colorigenic and chemiluminescen have verified that these mice carried the ras transgene and expressed it in the hemato organs (spleen and thymus) as well as in the kidney and the liver. We have found 2 or 3 cop the transgene per genome-equivalent. 10 mmol/kg of 2-butoxyethanol administered over 2 using osmotic minipumps have shown that this compound is devoided of epigenetic and gen effects as measured by (i) methylation of total and v-Ha-ras gene DNA, (ii) abse hydrophobic and hydrophilic DNA adducts. 2-butoxyethanol did not induce tumor formation transgenic mice. This animal model could be used as a screening test for possible carcin Chemicals.

Key words : Oncogenes, mammary tumor, v-Ha-ras transgenic mice, 2-butoxye methylation, DNA adduct, epigenetic effect, genotoxicity.

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