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c-erbB-2 ETMALADIE DE PAGET MAMMAIRE

TABLE I. - Study of c-erbB-2 according to histologic type of mammary carcinoma associated with Paget disease.

	Nombre de cas	c-fbB‘2 posrdf	ofbB-2 nógatłf
Carcinome intracanalaire	13	11	2
Carcinome intracanalaire	2	2	0
prćsumó micro-invasit Carcinome canalaire infiltrant ś composante intracanalaire prśdominante	6	6	0
Carcinome canalaire infiltrant	2	2	0
Total	23	21	2

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Erete a 1’emploi, Kit LSAB-K681, Dako) pendant 5 minutes.

’exces de serum est ensuite elimine avant de realiser 1’mcuba-tion avec 1’anticorps primaire anti-oncoproteine c-erbB-2 A485 (contenu dans le so!vant suivant: Tris/HCl: 0,05 M, NaCl: 0,1 M, NaN₃: 15 mM, pH 7,2} a la dilution de 1/100* dans du tampon phosphate PBS, pH 7,2. La concentration de P anticorps primaire anti-oncoprotćine c-erbB-2 A485 est de 1,5 g/1.

L’anticorps primaire anti-oncoproteine c-erbB-2 NCL-CB11 (10 pg/ml) est ailue au 1/40* dans du PBS, pH 7,2 et 1’anticorps primaire anti-oncoproteine c-erbB-2 NĆL-CBE1 (25 pg/ml) dilue au 1/10* dans du PBS, pH 7,2. Ces dilutions ont ete deter-minees apres differents essais.

Les incubations sont respectivement une heure en chambre humide a 37°C (anticorps pnmaire A485), une heure a temperaturę ambiante (anticorps primaire NCL-CB11) et toute la nuit a +4°C (anticorps primaire NCL-CBE1). Toutes les incubations ont ete effectuees a l*abri de la lumiere. Apres rinęage dans deux bains de PBS de 5 minutes, les coupes sont incubćes avec un anticorps de liaison biotinyle antisouris et antilapin (Dako) pendant 10 minutes a temperaturę ambiante. Puis les lames sont rin-cees dans deux bains de PBS de 5 minutes, recouvertes d’une solution de conjugue streptavidine-peroxydase (Dako) pendant dix minutes et de nouveau rincćes. La revelation est realisee avec un substrat a I’AEC (Dako-K697). Le Kit de revćlation contient 1 ml d’AEC (amino-3-ethyl-9-carbazole) dilue dans du dimethylformamide a 3 %, 2 fois 15 ml dc tampon acetate 0,1M, pH 5,2 contenant 15 mM NaN₃, et 1 ml de peroxyde d’hydro-gene a 3%. La revćlation (2 ml de tampon acćtate 0,1 M, Tgoutte d’AEC et une ęoutte de peroxyde d’hydrogene a 3%) s’effectue pendant 10 a 15 minutes a temperaturę ambiante. Enfin, les coupes ont subi une contre-coloration k Phematoxy-line de Harris et sont montees entrc lamę et lamelle en milieu aqueux.

Le contróle positif correspond k une lesion reconnue presen-ter un intense marauaęe avec 1’anticorps anti-oncoproteine c-erbB-2. Un contróle negatif est realise en omettant 1’anticorps primaire lors de la tecnnique immunohistochimique. Ces contróles sont integres a chaque serie de lames techniquees. Toute serie, pour laquelle ces demiers n’etaient pas satisfai-sants, a ete realisóe une seconde fois. En cas de desaccord sur Pinterpretation des cas, de nouve!les coupes ont ete realisees. Seules ont ete considerees comme positives, les lesions presen-tant un marquage epithelial membranaire net.

RESULTATS

La lesion cutanee mamelonnaire est associee a un carcinome intracanalaire dans 13 cas, a un carcinome intracanalaire presume micro-invasif dans 2 cas, a un carcinome canalaire infiltrant a composante intracanalaire predominante dans 6 cas, enfin a un carcinome canalaire infiltrant dans 2 cas (tableau I). Dans 8 cas, il n’existe pas d^nyahissement ganglionnaire (14 a 46ganglions examines par curage). Dans un seul cas, il existe une micrometastase ganglionnaire (sinusale cor-ticale) au niveau de l’un des 33 ganglions examines. La presence de 1’oncoproteine dans les 23 cas de maladie de Paget du mamelon a ete recherchee par la methode immunohistochimique a la fois au niveau des cellules tumorales intra-epidermiques et au niveau de la composante intracanalaire et infiltrante de 1’adenocarci-nome sous-jacent. Une hyperexpression de Ponco-proteine c-erbB-2 est observee dans 21 des 23 cas etudies sous la formę d’un immunomarquage membranaire net au niveau de toutes les cellules carcinoma-teuses quel que soit leur siege intra-epidermique

Pathologie Biologie Septembre 1995

TABLEAU I. - śtude de c-erbB-2 selon le type histołogique de carcinome mammaire associó ś la maladie de Paget

(fig. 1) ou intraglandulaire (fig. 2). II n’a pas ete observe d^łimmunomarquage dans 2 cas presentant une composante glandulaire de type intracanalaire pur.

Uensemble des 21 cas montrant une hyperexpres-sion de Toncoproteine presentait un immunomarquage quel que soit 1’anticorps utilise, mais il existe une legere difference d’intensite selon 1’anticorps (le mar-quage est toujours plus intense avec Tanticorps A 485 de Dako identifiant le domaine inteme).

Les structures neoplasiques sont toujours consti-tuees de grandes cellules (fig. 3), quel que soit leur siege (intracanalaire ou intraepidermique) et la naturę non invasive ou infiltrante du processus (fig. 4). La composante tumorale intracanalaire associee presente le meme profil de marquage que la composante inva-sive: elle est de type comedocarcinome pur ou mixte, associant des aspects de type massif, comedocarcinome et micropapillaire. Par ailleurs, nous avons accessoirement constate que cet immunomarquage a permis de confirmer le caractere micro-invasif d’une lesion intracanalaire.

DISCUSSION

Certaines equipes ont montre qu’il existe une etroite correlation entre la presence d’une amplification du gene c-erbB-2 et la presence de 1’oncoproteine, revelee par un marquage epithelial membranaire [8].

La misę en evidence de Toncoproteine c-erbB-2 par immunohistochimie est de realisation facile a partir de tissus fixes au Bouin alcoolique et inclus en paraffine [3], La positivite des cas repose sur la presence d’un marquage membranaire associe ou non a un marquage cytoplasmique [2, 10, 11, 17]. Le marquage cytoplas-mique non-specifique semble pouvoir etre evite par

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