5192605673

5192605673



BADANIE ODDZIAŁYWANIA BIAŁKO ■— UGAND 43

Tak czy inaczej, jeżeli ilość miejsc wiążących w rozpuszczalnym białku (n) nie jest z góry znana, nie można jej wyznaczyć przy zastosowaniu ilościowej chromatografii powinowactwa, przynajmniej w chwili obecnej. Natomiast nie przedstawia trudności wyznaczenie izotermy wiązania ligandów przez unieruchomione białka, co zaprezentowano na przykładzie oddziaływania pewnych leków z unieruchomioną albuminą surowicy (88). Wyznaczając objętości wymywania ligandów (VL) z kolumny z unieruchomionym białkiem techniką analizy czołowej oraz posługując się równaniem 11:

vL —v° = vż[B] — r    (równanie 11)

w którym Vż oznacza objętość fazy żelowej, otrzymano krzywoliniowy wykres Scatcharda, interpretowany za pomocą modelu dwóch klas miejsc wiążących.

V. Klasyczne metody elektroforetyczne

Techniki elektroforetyczne pozwalają na mierzenie ruchliwości elektro-foretycznej białek — wielkości, która ulega znacznym zmianom wskutek oddziaływania białkowych makrojonów z innymi jonowymi substancjami. Z tego typu oddziaływaniami związany jest jednak szereg teoretycznych i praktycznych problemów, nie spotykanych w przypadku obojętnych ligandów. Zagadnienia te omówione są w cytowanych już pracach (3, 4). Oddziaływania elektrostatyczne sprawiają, że miejsca wiążące jony nie są niezależne. Uwzględnienie tego efektu prowadzi do wyrażenia na stałą mikroskopową:

k, = (k0)i e-2wZZl-    (równanie 12)

gdzie: ZB — oznacza ładunek białka, ZL — ładunek ligandu, a w jest pewną stalą, zależną m.in. od promienia makrojonu i ligandu. Równanie 3 przybiera wtedy złożoną postać:


n, (kp)i [L] ę~2wZBzt-1 +(k0), [L] e-2wZbZl

Jeżeli niewielka ilość jonów wiąże się z białkiem o małym ładunku netto, wtedy człon wykładniczy w równaniu 12 jest zanied by walny, co oznacza, że elektrostatyczne oddziaływania między miejscami wiążącymi można zignorować.

W przypadku, gdy ligandem jest jon metalu, badaną równowagę należy najczęściej rozpatrywać jako współzawodnictwo ligandu z jonami wodorowymi o te same miejsca wiążące.



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
U5] BADANIE ODDZIAŁYWANIA BIAŁKO — UGAND 47 ności równania 17. Ogromną wadą opisanej metodyki j
IMG 93 [3] Pisarz i jego sobowtór 49 biograf izmowi, ale obie tendencje prowadzą tak czy inaczej do
KI9 od podatków1. Tak czy inaczej, biznesmenami każdej narodowości powinny kierować inne ważne powo
IMG 93 [3] Pisarz i jego sobowtór 49 biograf izmowi, ale obie tendencje prowadzą tak czy inaczej do
IMGE spojlowanie programu robinsonowie mogą prowadzić do następnych. Tak czy inaczej, jakieś rozwiąz
[3] BADANIE ODDZIAŁYWANIA BIAŁKO — LIGAND 35 wiążących ligand w makrocząsteczce. Z zależności
[5] BADANIE ODDZIAŁYWANIA BIAŁKO — LIGAND 37 ale również zniekształcenia wykresu Scatcharda, co
[7] BADANIE ODDZIAŁYWANIA BIAŁKO — LIGAND *59 frakcje z obszaru plateau (3 wykorzystać do wyzna
[9] BADANIE ODDZIAŁYWANIA BIAŁKO — LIGAND 4H B + La ^ BLab + + L„ Lb Kb U Kba U
[13] BADANIE ODDZIAŁYWANIA BIAŁKO — LIGAND 45 Zaletą tej techniki jest prostota oraz możliwość
[17] BADANIE ODDZIAŁYWANIA BIAŁKO — LIGAND 49 37.    Stevens R.
[19] BADANIE ODDZIAŁYWANIA BIAŁKO — LIGAND 51 97.    Alberty R. A., Marvin H. H.
Z HISTORII BIBLIOTEKARSTWA POLSKIEGO 203 permanentne kłopoty? Tak czy inaczej, czytelnik napotka w l
etyka msroda1 M.ii mii PKZEŁi;( KI że racjonalmiM. i gr.iriiczają. mówiąc swobodnie, do tak czy ina
56850 Zdjęcie1211 (3) ^yitr ważniejsza w koncepcji socjologu autora o ^J-/Iclioiu. Tak czy inaczej w
Oko3 jpeg ujawnienie, a nie od bagażu tak czy inaczej ze sobą powiązanych wiadomości. Hołdując takie

więcej podobnych podstron