PODSTAWY BIOTECHNOLOGII PRZEMYSŁOWEJ

KSZTAŁTOWANIE PROCESU BIOTECHNOLOGICZNEGO

A)

I.

WPŁYW STĘŻENIA ALKOHOLU NA WZROST DROŻDŻY

1.

Rozlać jałowo podłoże GYEP (2% glukozy, 1% ekstraktu drożdżowego, 1%

peptonu) po 10 cm

3

do 3 kolb stożkowych

2.

Sporządzić, zachowując warunki jałowości, rozcieńczenia alkoholu

etylowego wg następującego schematu:

Końcowe stężenie alkoholu (%)

0

5

15

Podłoże GYEP (cm

3

)

10

10

10

Woda jałowa (cm

3

)

10

9,0

7,0

Etanol (cm

3

)

0,0

1,0

3,0

3.

Zaszczepić przygotowane podłoża zawiesiną drożdży piekarskich (0,2 cm

3

),

dokładnie wymieszać zaczepione podłoże.

4.

Zważyć kolby i umieścić w cieplarce (hodowla stacjonarna).

5.

Obliczyć liczbę komórek drożdży zawartą w 1 cm

3

założonej hodowli.

II.

WPŁYW pH PODŁOŻA HODOWLANEGO NA WZROST DROŻDŻY

1.

W trzech zlewkach umieścić po 20 cm

3

przygotowanych wcześniej buforów

fosforanowych.

2.

Dodać do każdej ze zlewek po 0,4g sacharozy, 0,2g ekstraktu drożdżowego i

0,2g peptonu. Dokładnie wymieszać podłoże.

3.

Wyjałowić podłoże przy użyciu jałowego filtru strzykawkowego

CHROMAFIL do jałowych kolb stożkowych na 100 cm

3

.

4.

Zaszczepić przygotowane podłoża zawiesiną drożdży piekarskich (0,2 cm

3

),

dokładnie wymieszać.

5.

Zważyć kolby i umieścić w cieplarce.

6.

Obliczyć liczbę komórek drożdży zawartą w 1 cm

3

założonej hodowli.

III.

WPŁYW SKŁADU PODŁOŻA HODOWLANEGO NA WZROST
DROŻDŻY

1.

Rozlać po 20 cm

3

podłoża bazowego (0,25g (NH

4

)

2

HPO

4

i 0,25g (NH

4

)

2

SO

4

na 100 cm

3

wody) do 3 zlewek.

2.

Następnie dodać do zlewki nr 1 - 1,4 g laktozy (I próba), do zlewki nr 2 - 2,3 g

rafinozy (II próba) oraz do zlewki nr 3 - 1,4 g sacharozy (III próba).

3.

Dokładnie wymieszać roztwory (do całkowitego rozpuszczenia się cukrów).

4.

Wyjałowić podłoża przy użyciu jałowego filtru strzykawkowego

CHROMAFIL do kolb stożkowych na 100 cm

3

.

5.

Zaszczepić pożywki zawiesiną drożdży piekarskich (0,2 cm

3

), ponownie

dokładnie wymieszać.

6.

Zważyć kolby i umieścić w cieplarce.

7.

Obliczyć liczbę komórek drożdży zawartą w 1 cm

3

założonej hodowli.

IV.

PORÓWNANIE WYDAJNOŚCI TWORZENIA BIOMASY RÓŻNYCH

SZCZEPÓW DROŻDŻY

1.

Rozlać jałowo podłoże GYEP (2% glukozy, 1% ekstraktu drożdżowego, 1%

peptonu) po 20 cm

3

do 3 kolb stożkowych.

2.

Zaszczepić, podłoże drożdżami (2 oczka ezy na każdą kolbkę):

•

(1) piekarskie

•

(2) paszowe

•

(3) winiarskie lub browarnicze

3.

Dokładnie wymieszać wszystkie hodowle.

4.

W komorze Thoma oznaczyć liczbę drożdży w 1 cm

3

w każdej z hodowli.

5.

Zważyć kolby i umieścić w termostacie.

PO TYGODNIU W OTRZYMANYCH HODOWLACH OZNACZYĆ:

1.

Masę kolbek

2.

Żywotność drożdży

-

preparat barwiony wodnym roztworem błękitu metylenowego, komórki

martwe barwią się na niebiesko, żywe pozostają bezbarwne.

3.

Odżywienie komórek

-

preparat barwiony płynem Lugola, komórki zawierające glikogen barwią się na

ciemnobrunatny (brązowy kolor), pozostałe na jasnożółty.

4.

Liczbę komórek w 1 cm

3

gęstwy drożdżowej w komorze Thoma.

Obserwacje, wyniki i wnioski należy przedstawić w formie sprawozdania w zeszycie

ćwiczeniowym.