Nr. 4

Mateusz Stoszko

KSZTAŁTOWANIE PROCESU

BIOTECHNOLOGICZNEGO

Wpływ stężenia alkoholu etylowego na wzrost drożdży.

Przebieg doświadczenia:

+ rozlano po 10 cm

3

podłoża GYEP (2% glukozy, 1% ekstraktu drożdżowego, 1% peptonu) do 3 kolbek

+ sporządzono 3 rozcieńczenia alkoholu etylowego po 0%, 5%, 15% każdy w kolbach zawierających podłoże
GYEP
+ przygotowane podłoża w kolbkach zaszczepiono zawiesiną drożdży piekarskich (0,2cm

3

) i wymieszano r-r

+ kolby zważono, policzono liczbę komórek drożdży (przy użyciu komory Thoma) oraz zbadano ich żywotność i
odżywienie
+ przeniesiono do inkubacji (hodowla stacjonarna)
+ po tygodniu od założenia hodowli ponownie kolbki zważono, policzono liczbę komórek, zbadano żywotność i
odżywienie

Obserwacje:
Po okresie inkubacji:

Masy kolbek zmalała. Liczba komórek wzrosła o ponad 3 rzędy wielkości. Żywotność komórek znacznie
zmalała. Po dokonaniu obserwacji mikroskopowej stwierdzono niskie odżywienie komórek drożdży.

Dane w tabeli na końcu sprawozdania.

Wnioski:

Z danych liczbowych wynika, że drożdże preferują niskie stężenia etanolu w środowisku, największy wzrost

osiągnęły w stężeniu 5%, natomiast najwyższą żywotność w środowisku którego początkowe stężenie etanolu wynosiło
0%. Zmiana masy kolbek była spowodowana reakcjami które komórki drożdży przeprowadzały w podłożu, w wyniku
których wydzielał się głównie dwutlenek węgla, który wydostawał się z układu do atmosfery, zmniejszając masę
badanego materiału.

Wpływ pH podłoża hodowlanego na wzrost drożdży.

Przebieg doświadczenia:

+ do 3 zlewek wlano po 20cm

3

buforów fosforanowych

+ do każdej zlewki dodano po 0,4g sacharozy, 0,2g ekstraktu drożdżowego i 0,2g peptonu

+ przy pomocy filtru strzykawkowego wyjałowiono podłoże do jałowych kolb stożkowych o V = 100cm

3

+ zaszczepiono podłoża w kolbkach 0,2cm

3

zawiesiny drożdży piekarskich i dokładnie wymieszano r-r

+ policzono komórki drożdży, zbadano żywotność i odżywienie

+ przeniesiono do inkubacji na 7 dni

+ po tygodniu ponownie zważono kolbki, policzono komórki i zbadano żywotność oraz odżywienie

Obserwacje:
Po okresie inkubacji:

Masy wszystkich kolbek zmniejszyły się. Liczba komórek wzrosła o ponad rząd wielkości. Żywotność komórek
zmalała. Po dokonaniu obserwacji mikroskopowej stwierdzono wyższe odżywienie komórek drożdży w
porównaniu z hodowlą wyjściową.

Dane w tabeli na końcu sprawozdania.

Wnioski:

Drożdżom sprzyjało pH kwaśne. W takim środowisku wzrosło odżywienie drożdży, żywotność była lepsza w

porównaniu z pH zasadowym. Także wzrost był wyższy w środowisku kwaśnym.

Wpływ składu podłoża hodowlanego na wzrost drożdży.

Przebieg doświadczenia:

+ do 3 zlewek wlano po 20cm

3

podłoża bazowego [0,25g (NH

4

)HPO

4

i 0,25g (NH

4

)

2

SO

4

na 100 cm

3

wody]

+ następnie dodano do zlewki:

I – 1,4g laktozy

II – 2,3g rafinozy

III – 1,4g sacharozy

+ dokładnie wymieszano zawartość zlewek

+ przy użyciu filtra strzykawkowego wyjałowiono podłoża do kolb o V = 100cm

3

+ zawartość każdej kolby zaszczepiono 0,2cm

3

zawiesiny drożdży piekarskich i dokładnie wymieszano

+ kolby zważono, policzono komórki, zbadano żywotność i odżywienie

+ kolby przeniesiono do inkubacji a 7 dni

+ po tygodniu ponownie zważono kolbki, policzono komórki, zbadano odżywienie i żywotność

Obserwacje:
Po okresie inkubacji:

Masy wszystkich kolbek zmniejszyły się. Liczba komórek wzrosła o ponad rząd wielkości. Żywotność komórek
zdecydowanie zmalała. Po dokonaniu obserwacji mikroskopowej stwierdzono wyższe odżywienie komórek
drożdży w porównaniu z hodowlą wyjściową.

Dane w tabeli na końcu sprawozdania.

Wnioski:

Sacharoza jest najlepiej stymuluje rozwój komórek drożdży. W środowisku wzrosło odżywienie drożdży. Także

wzrost, liczba komórek była wyższa.

Porównanie wydajności tworzenia biomasy różnych szczepów drożdży.

Przebieg doświadczenia:

+ rozlano jałowo do 3 kolb stożkowych 20cm

3

podłoża GYEP (2% glukozy, 1% ekstraktu drożdżowego, 1%

peptonu)
+ podłoża każdej z kolb zaszczepiono (po 2 oczka ezy) drożdżami

Piekarskimi

Paszowymi

Winiarskimi

+ zawartość kolb dokładnie wymieszano – do „rozpuszczenia” grudek kolonii drożdży
+ zbadano żywotność drożdży z każdej hodowli z pomocą błękitu metylenowego – żywe komórki bezbarwne,
martwe zabarwione na błękitny kolor
+ zbadano odżywienie komórek z każdej hodowli z pomocą płynu Lugola – komórki zawierające glikogen
barwią się na ciemnobrunatny kolor (komórki dobrze odżywione) pozostałe na jasnożółty (komórki młode)
+ oznaczono liczbę komórek drożdży w 1cm

3

każdej z hodowli w komorze Thoma

+ każdą kolbę zważono i umieszczono w termostacie
+ po namnożeniu (po tygodniu) ponownie kolbki zważono
+ oznaczono żywotność, odżywienie oraz liczbę komórek drożdży

Obserwacje:
Po okresie inkubacji:

Masa kolbek zmalała. Liczba komórek wzrosła o ok. 2 rzędy wielkości. Żywotność nieco spadła natomiast
odżywienie pozostało bez większych zmian.

Dane w tabeli na końcu sprawozdania.

Wnioski:

Drożdże winiarskie wykazały najintensywniejszy wzrost.

Masa kolbek [g]

Liczba komórek

Żywotność [%

martwych]

Odżywienie

K

H

K

H

K

H

K

H

Alkohol

0 %

82,60

81,21

9,5 ∙ 10

6

2,88 ∙ 10

9

0

4,5

+

-

5 %

87,91

87,04

5,75 ∙ 10

10

0

34

+

-

15 %

93,36

91,49

4,84 ∙ 10

9

0

43

+

+/-

pH

3

78,69

77,98

5,5 ∙ 10

6

1,44 ∙ 10

8

0

7,3

-

+

5

76,65

75,49

8,40 ∙ 10

7

0

1,1

-

+/-

8

86,56

85,89

3,20 ∙ 10

7

0

15

-

-

Źródło

węgla

L

89,56

88,98

6,7 ∙ 10

6

2,08 ∙ 10

7

4

40

-

+

F

70,79

70,37

3,20 ∙ 10

7

4

50

-

+

S

78,86

79,18

1,33 ∙ 10

8

4

50

-

+

Szczep

drożdży

Piekarnicze

93,33

91,41

2,4 ∙ 10

6

2,92 ∙ 10

8

0

5

+/-

+

Winiarskie

89,69

87,02

9,7 ∙ 10

6

2,20 ∙ 10

8

0

5

+

+

Paszowe

78,54

77,57

9,2 ∙ 10

8

4,80 ∙ 10

8

0

15

+

+