2011-05-25

1

Konserwacja nasienia knura,

inseminacja loch

Dr hab. Wojciech Niżański

Konserwacja nasienia

W niskich temperaturach <0

o

C

W stanie płynnym >0

o

C

PODSTAWOWA

METODA

KONSERWACJI

NASIENIA KNURA

!!!!

Konserwacja w stanie płynnym

pobranie 2 frakcji nasienia metodą na rękę

przecedzenie, ocena

rozrzedzenie nasienia w stosunku od 1:1 do

1:7 rozrzedzalnikiem o tem. 33⁰C

wolne schładzanie mieszaniny do tem. śr 17 ⁰C

przez ok. 4-5 godz.

przygotowanie dawek inseminacyjnych:

objętośd:

50 -100 ml

koncentracja:

3-5 mld plemników o ruchu prawidłowym

Konserwacja nasienia knura w stanie

płynnym

• EDTA: sól kwasu etyleno- di – amino

tetraoctowego, który cheletuje jony Ca

++,

Mg

++

i

• Zn

++

, jony uczynniające enzymy proteolityczne

• Rola innych skladnikow rozrzedzalników
-glukoza
-sole
-antybiotyki
-…

Konserwacja nasienia knura w stanie

płynnym - rozrzedzalniki

Składnik

Pliszko I

Pliszko II

Merck

Glukoza

60.00

60.00

53.68

EDTA

3.7

1.85

1.8

Cytr sodu

10.00

1.5

3.3

NaOH 4%

8.0

0.6

-

NaHCO

3

-

-

3.3

Streptom

0.5

0.5

-

Gentam

-

-

0.018

Aqua bidest

1000.0

1000.0

1000.0

3 dni 15-18

o

C

6 dni 12-18

o

C

tydzieo w temp

pokojowej

Inne: MRA, Androstar, Safecell, BTS

Konserwacja nasienia knura w niskich temperaturach

Ampułki

Metody:

Pelety – kulki na suchym

lodzie

Tuby, plastikowe

słomki 0,5; 5 ml

2011-05-25

2

Konserwacja nasienia knura w niskich temperaturach

rozrzedzalniki

ROZRZEDZALNIK NR I Merck (modyfik)

substancja

ilośd

Glukoza
Cytrynian sodu dwuwodny
EDTA (wersenian disodowy)
Na

2

HCO

3

Gentamycyna

H

2

0 destylowana ad

53, 3
3, 6 g
1,8
1,2
0,018
1000 ml

ROZRZEDZALNIK nr II zimny

substancja

ilośd

11% laktoza
żółtko jaja kurzego

80%
20%

Rozrzedzalnik nr III

substancja

ilośd

rozrzedzalnika nr II
glicerolu
Orvus Es Paste (detergent)

92 ml
6 ml
0,2 ml

Postępowanie w metodzie Hannower

Pobrad drugą frakcję plemnikową (metoda na

rękę„) przecedzid, ocenid jakośd nasienia

Do nasienia dodad rozrzedzalnik Merck

(l :2) w temperaturze 30 °C

pozostawid w temp. pokojowej (20 °C) przez

1,5 h

Umieścid mieszaninę w temp 15-18 ° C na kolejne 3 h

Wirowanie – 10 min/2 tys obr./min

Odlad supernatant-

zamrażarka!

Do osadu dodad rozrzedzalnik „zimny„ (nr 2)

Rozrzedzone nasienie pozostawid w temp,

4-5 °C na 1,5 godz.

Tuż przed mrożeniem dodad rozrzedzalnik nr 3,

tak aby koncentracja wynosiła 1,5 x 10

9

/ ml

Napełnienie tub: 5- 6 ml nasienia

Mrożenie w parach ciekłego azotu LN

2

(-120 °C)

– 20 minut

Zamrożenie w LN

2

(-196 °C)

Konserwacja nasienia knura w niskich temperaturach

•

Tuba do łaźni wodnej o temp. 50 °C na 40 sek.

• Odciąd nasadę tuby, zawartośd zaaspirowad do

strzykawki wraz z 80 ml rozrzedzalnia Merck (w skład
którego wchodzi 30% osocza nasienia)

Rozmrażanie

Inseminacja loch

Owulacja występuje 30-40 od pierwszych

objawów rujowych

Inseminacja loch:

Termin unasienniania:

24 h od objawów

tolerancji

Reinseminacja po 12 – 24 h

2011-05-25

3

Dawka inseminacyjna:

objętośd: 80 -100 ml, liczba plemników od 3 do 5 mld

Sztuczna inseminacja loch

Klasycznie-doszyjkowo

Głęboka domaciczna

Kateter inseminacyjny „GEDIS”

2011-05-25

4

Dawka: 3 miliardy plemników

Dawka: 1 miliard plemników

Dawka: 150 milionów plemników