2. Izolowanie mikroorganizmów z różnych środowisk
naturalnych
Cel ćwiczenia
•
Izolowanie mikroorganizmów z wody i gleby na stałe podłoża hodowlane
•
Nauka metod posiewu na stałe podłoża hodowlane
Metody otrzymywania czystych kultur
•
Metody bezpośrednie
•
Metody pośrednie
Metody bezpośrednie
•
Przy użyciu mikromanipulatora (zasysanie jednej komórki mikroorganizmu)
•
Metoda Lindnera (drożdże lub inne grzyby w kropli wody na szkiełku nakrywkowym)
Metody pośrednie
•
Metoda posiewu redukcyjnego
•
Metoda posiewu powierzchniowego (płytki „mazane")
•
Metoda posiewu wgłębnego (płytki „lane")
•
Metoda seryjnych rozcieńczeń
•
Metoda replik (płytek odciskowych Lederberga)
Metoda posiewu powierzchniowego (płytki „mazane")
•
Przygotowanie odpowiedniego rozcieńczenia
•
Wprowadzenie 0,1 ml zawiesiny z danego rozcieńczenia na środek płytki z podłożem
agarowym
•
Rozprowadzenie na powierzchni płytki przy pomocy głaszczki szklanej wyjałowionej przez
zanurzenie w alkoholu i opalenie w płomieniu palnika
Schemat metody posiewu powierzchniowego (płytki „mazane")
Schemat metody posiewu powierzchniowego (płytki „mazane")
Metoda posiewu wgłębnego (płytki „lane")
•
Odmiana metody płytek „mazanych"
•
Z najwyższych rozcieńczeń pobiera się ilościowo zawiesinę mikroorganizmów i dodaje do
upłynnionego schłodzonego podłoża w probówce (10-12 ml)
•
Po wymieszaniu całość wylewa się na sterylną płytkę Petriego (po zastygnięciu wyrastają
kolonie wgłębne, denne i powierzchniowe)
Metoda seryjnych rozcieńczeń
•
Służy do wyizolowania czystych hodowli z materiału płynnego
•
Polega na wielokrotnym rozcieńczaniu w celu otrzymania w probówce jednej komórki
•
Rzadko stosowana
Metoda replik (płytek odciskowych Lederberga)
•
Stosowana w badaniach genetycznych głównie bakterii w celu rozróżnienia z mieszaniny
mikroorganizmów tych, które spełniają określone właściwości
•
Wysiew zawiesiny bakterii na zwykłe podłoże agarowe
•
Po wyrośnięciu pojedynczych kolonii przykładany jest jałowy stempel pokryty welurem, do
którego przyczepiają się komórki, które następnie są przenoszone na selektywne pożywki
(wzrost tylko komórek zdolnych do rozwoju na tym podłożu)
Obliczanie liczby mikroorganizmów w 1g świeżej masy gleby lub 1 ml
wody
D = K x R x O
D - ogólna liczba drobnoustrojów w 1g świeżej masy gleby lub 1 ml wody
K - średnia liczba kolonii na płytce Petriego
R - odwrotność rozcieńczenia, z którego wykonano posiew na podłoże
O - współczynnik korygujący (uwzględniający przeliczenie mikroorganizmów na 1 g gleby lub 1ml
wody, przy wysiewie 0,1 ml należy podstawić do wzoru 10)