

Izolacja limfocytów ze śledziony:



Ułożyć mysz na prawym boku.



Odkazić skórę etanolem.



Naciąć a następnie odciągnąć skórę.



Przeciąć otrzewnę i uwidocznić śledzionę.



Wyciąć śledzionę (nożyczki i pęsetka).



Umieścić śledzionę na szalce Petrie’go z 10% MEM.



„Wyczesać” śledzionę igłą preparacyjną lub nożyczkami.



Zebrać płyn (z limfocytami) do probówki.



Odstawić zawiesinę na 15 min. w celu oddzielenia się większych fragmentów tkanki.



Zebrać klarowny płyn do probówek.



Wirować – 1500 rpm przez 5 min.



Zlać supernatant.



Osad komórek zawiesić w 0,5-1ml 10% MEM.



Określenie żywotność limfocytów:



Poprać próbkę zawiesiny komórek i rozcieńczyć 1:10 w PBS .



Dodać 4 krople 0,1% wodnego roztworu błękitu trypanu.



Kroplę zabarwionej zawiesiny nanieść na szkiełko podstawowe i nakryć szkiełkiem
nakrywkowym.



Policzyć 100 komórek, określając jaki procent komórek zabarwił się koloidowym
barwnikiem (są to komórki martwe).



Wynik wyrazić w procencie żywych komórek.