l a b o r a t o r i u m 7 - 8 / 2 0 1 0

|

s p r z ę t

i

a p a r a t u r a

l a b o r a t o r y j n a

48

s p r z ę t

i

a p a r a t u r a

l a b o r a t o r y j n a

|

l a b o r a t o r i u m 7 - 8 / 2 0 1 0

49

się z cząsteczkami analitu, a liczba przyłączonych ładunków
jest proporcjonalna do wielkości cząstki. Elektrostatycznie
naładowane cząsteczki analitu są następnie kierowane przez
pułapkę jonową do kolektora. Pułapka jonowa ma na celu
wychwycenie jonów azotu, do których nie przyłączyły się
cząsteczki analitu. W kolektorze następuje oddanie ładun-
ków połączonych z cząsteczkami analitów. Oddany ładunek
elektryczny mierzony jest za pomocą czułego elektrometru,
a jego wartość jest proporcjonalna do ilości analitu w bada-
nej próbce.

Detektor Corona CAD umożliwia oznaczanie związków

w warunkach nebulizacji: temperatury pokojowej i ciśnienia
atmosferycznego. Faza ruchoma powinna składać się z lot-
nych substancji, które można łatwo odparować. Stosowane
są te same fazy ruchome jak w spektrometrii mas. Detektor
wyładowań koronowych pozwala na pracę w gradiencie, co jest
problemem np. w detekcji refraktometrycznej.

Uniwersalność detektora Corona CAD pozwala na zastoso-

wanie go do oznaczania całego spektrum związków chemicz-
nych, np. białek, DNA, oligonukleotydów, aminokwasów czy
oligosacharydów. Oznaczanie tych ostatnich stanowi często
problem w analizach chromatograficznych. Wynika to z fak-
tu, że cząsteczki cukrów nie posiadają grup chromoforowych,
co uniemożliwia stosowanie detekcji UV-VIS. W takiej sytu-
acji można z powodzeniem wykorzystać detektor wyładowań
koronowych Corona CAD.

Detektor wyładowań koronowych można również stoso-

wać w tzw. szybkiej chromatografii. Zaprojektowana została
specjalna wersja detektora – Corona ultra. Charakteryzuje się
ona wyższą częstotliwością zbierania danych (100 Hz) oraz
możliwością ustawienia temperatury w nebulizerze.



Rozdział oligosachaRydów

z użyciem coRona cad

Opracowana została metoda oznaczania oligosacharydów
(glukoza, maltoza, maltotrioza, maltotetroza, maltopentoza,
maltoheksoza i maltoheptoza) z użyciem detektora Corona
CAD, której granice detekcji można oszacować na pozio-
mie < 5 ng. Do rozdziału wykorzystano kolumnę Asahipak
NH2P-50 (4,6 x 250 mm, 5 µm) firmy Shodex. Parametry
zestawu HPLC to: przepływ 1 ml/min, temperatura kolumny
35°C, objętość nastrzyku 10 µl, faza ruchoma (A – acetoni-
tryl, B – woda), gradient: czas 0,01 min 30% B, 40,0 min 70%

B, 40,01 min 30% B, 50,0 min 30% B. Do analizy wykorzy-
stano standardy oligosacharydów, które przygotowano przez
rozpuszczenie 1 mg substancji w 70% acetonitrylu. Na rys. 2
zaprezentowano przykładowy chromatogram przedstawiający
rozdział mieszaniny standardowych oligosacharydów. W oknie
głównym jest pokazany rozdział mieszaniny oligosacharydów
w ilości 200 ng każdego z nich na kolumnie, małe okno
przedstawia analogiczny chromatogram, z tym że ilość każ-
dego składnika mieszaniny to 5 ng na kolumnie.
Zaprezentowane chromatogramy stanowią doskonały przykład
zastosowania detekcji wyładowań koronowych do związków
chemicznych, które nie posiadają grup chromoforowych.



Podsumowanie

Detektor wyładowań koronowych Corona CAD stanowi do-
skonałą alternatywę i uzupełnienie dla klasycznych detektorów
w sytuacjach, kiedy oznaczane substancje nie posiadają grup
chromoforowych. Innowacyjna koncepcja pozwala na stoso-
wanie detektora do oznaczeń wszystkich nielotnych substan-
cji, a jego odpowiedź nie zależy od ich budowy chemicznej.
Detektor wyładowań koronowych Corona CAD może być
sprzęgany z dowolnym zestawem HPLC. Charakteryzuje się
wysoką czułością, szerokim dynamicznym zakresem pomia-
rowym, powtarzalnością wyników i prostotą obsługi. Podsu-
mowując, detektor Corona CAD posiada wszystkie cechy
uniwersalnego detektora HPLC.
Detektor wyładowań koronowych jest również dostępny w wer-
sji zaprojektowanej do szybkiej chromatografii.

q

Corona CAD

– nowa jakość w detekcji HPLC

U

V-VIS jest prawdopodobnie naj-
częściej stosowanym detektorem
w HPLC, ale zawodzi, gdy badane

związki nie posiadają grup chromofo-
rowych. Detektor refraktometryczny
jest uniwersalny, ale cechuje się niższą
czułością i nie umożliwia pracy w gra-
diencie. Oprócz tych dwóch mamy
co najmniej kilka innych możliwości,
każda z nich ma jednak mniejsze lub
większe ograniczenia.



detektoR coRona cad

Od pewnego czasu dostępny jest
na rynku zupełnie nowy, uniwersalny
detektor, który łączy w sobie czułość
detektora UV-VIS z uniwersalnością
refraktometru. Detektor wyładowań
koronowych (lub naładowanego aero-
zolu) Corona CAD (ang. charged aerosol

detector

) pozwala na wykrywanie sub-

stancji, dla których prężność par jest
niższa od 10

-5

hPa, a jego odpowiedź

nie zależy od ich budowy chemicznej.
Zasada działania detektora pokazana
jest na rys. 1. Detektor Corona CAD
wymaga dostarczania gazu. Zalecane
jest, aby był to azot lub czyste sprężo-
ne powietrze.

Eluat opuszczający kolumnę wprowa-

dzony jest do nebulizera, gdzie za po-
mocą strumienia gazu tworzy się aero-
zol. Aerozol kierowany jest przez tubę
osuszającą, gdzie następuje odparowanie
składników fazy ruchomej, do komory
wyładowań koronowych. W tej komo-
rze cząsteczki analitów „zderzają się”
ze strumieniem dodatnio naładowanych
jonów azotu utworzonych podczas wy-
ładowań koronowych. Jony azotu łączą

StreSzczenie

W niniejszym

artykule przedstawione jest nowatorskie
podejście do detekcji HPLC. Detektor
wyładowań koronowych Corona CAD jest
uniwersalnym detektorem, który umożliwia
oznaczanie dowolnej, nielotnej, substancji.
Jego odpowiedź nie zależy od budowy
chemicznej oznaczanego związku
chemicznego. Oprócz omówienia budowy
i zasady działania detektora Corona CAD
przedstawiony został przykładowy rozdział
oligosacharydów z użyciem tego detektora.

Słowa kluczowe

detekcja HPLC,

detektor wyładowań koronowych,
rozdział oligosacharydów

Summary

In this article the novel

approach to the HPLC detection has
been presented. The charged aerosol
detector is an universal detector, which
is capable of measuring any sufficiently
non-volatile compound. The response
of Corona CAD is independent
of chemical properties of the analyte.
Besides the main points associated with
the working principle also the application
of Corona CAD detector to the separation
of oligosaccharides has been presented.

key wordS

HPLC detection,

charged aerosol detector,
separation of oligosaccharides

reklama

Rys. 1. Schemat działania detektora wyładowań koronowych Corona CAD

Rys. 2. Chromatogram pokazujący rozdział oligosacharydów (200 ng na kolumnie w oknie
głównym, 5 ng na kolumnie w oknie wewnętrznym)

dr Rafał Bachorz

Polygen SP. z o.o.