Pobieranie próbek do badań
Pobieranie próbek do badań
mikrobiologicznych.
mikrobiologicznych.
Sporządzanie pisma przewodniego i
Sporządzanie pisma przewodniego i
przesyłanie do laboratorium.
przesyłanie do laboratorium.
W jakim celu pobieramy próbki do badań
mikrobiologicznych:
diagnostyki określonych chorób
zakaźnych zwierząt,
sprawowania nadzoru nad zdrowiem
zwierząt,
wystawiania certyfikatów
poświadczających zdrowie zwierząt,
monitoringu skuteczności leczenia lub
szczepień.
Próbki mogą być pobierane od zwierząt:
żywych,
padłych,
poddanych ubojowi lub zabitych,
jak również ze środowiska,
Próbki powinny być pobierane z uwzględnieniem
celu, kierunku badania i metody, którą będą
badane, a ich wielkość i liczba powinny pozwalać
na uzyskanie statystycznie ważnych wyników.
W przypadku chorób o przebiegu klinicznym
pobrane próbki powinny być reprezentatywne
dla stanu zdrowia i stwierdzonych zmian.
Wskazane jest pobranie próbek od kilku
zwierząt, co stwarza większe szanse na
wykrycie czynnika zakaźnego (wirusów,
bakterii).
W każdym przypadku manipulacja materiałem
biologicznym pochodzącym
od zwierząt żywych lub martwych wymaga
zachowania ostrożności w celu
uniknięcia potencjalnego ryzyka zakażenia
chorobami odzwierzęcymi, skażenia
środowiska lub rozprzestrzenienia się choroby.
W związku z powyższym, należy
właściwie zabezpieczać zwierzęta i tkanki
generujące niebezpieczeństwo
skażenia.
Materiał od żywych zwierząt należy pobierać
bez zadawania zwierzęciu
zbędnego bólu oraz z zachowaniem szczególnej
ostrożności w celu uniknięcia
niepotrzebnego stresu lub zranienia zwierzęcia,
jak również zagrożenia dla
pobierającego próbkę lub innych osób
uczestniczących w próbkobraniu.
Koniecznym może być mechaniczne
poskromienie zwierzęcia, zastosowanie
środków uspokajających lub narkozy.
Miejsca, z których pobierane są próby, nie
mogą być odkażane, ponieważ
nawet nieznaczna ilość środka odkażającego
może inaktywować zarazek.
Należy takie miejsca oczyścić lub opłukać wodą
bez detergentów i środków
dezynfekcyjnych. Próbki materiału
biologicznego pobiera się czystymi
jałowymi narzędziami najlepiej jednokrotnego
użycia
JAK PRAWIDŁOWO POBRAĆ MATERIAŁ DO BADAŃ
MIKROBIOLOGICZNYCH ?
1. aby zapewnić właściwą i pełną analizę materiału
przesyłanego do badań pobrane próbki muszą
pochodzić z miejsca, w którym toczy się proces
chorobowy, ponieważ jest to najbardziej
prawdopodobne miejsce występowania zarazka
2. materiał do badań powinien być pobrany
sprawnie, czysto i dokładnie, tak aby uniknąć
zanieczyszczenia mikroflorą saprofityczną
pochodzącą z okolicznych tkanek lub ze środowiska
3. materiał biologiczny należy pobierać do jałowych,
szczelnych i odpornych na stłuczenie pojemników,
probówek, butelek lub specjalistycznych wymazówek
z podłożem transportowym; każda próbka musi być
dokładnie i trwale oznakowana (np. imię pacjenta,
nazwisko właściciela lub nadany numer)
4. pobrany materiał należy umieścić w odpowiednim
opakowaniu transportowym, zapewniającym
bezpieczne dotarcie próbek do laboratorium (np.
koperta pęcherzykowa, karton wypełniony
styropianem lub watą)
5. materiał biologiczny powinien być przesyłany do
laboratorium w odpowiedniej temperaturze (dla
większości próbek jest to temperatura +4°C) - do
transportu próbek można wykorzystać kontener z
lodem, lodówkę transportową wyposażoną w
specjalne wkłady chłodzące lub termos
6. aby badanie było wiarygodne materiał powinien
być jak najszybciej dostarczony do laboratorium
(najlepiej w ciągu kilku godzin od pobrania); jeśli
próbki będą przesyłane listem priorytetowym,
materiał należy dostarczyć o odpowiedniej godzinie
do urzędu pocztowego, tak, aby mieć pewność, że
przesyłka zostanie nadana jeszcze tego samego dnia
7. do próbki musi być dołączone pismo przewodnie, w
którym należy podać wszelkie informacje niezbędne do
prawidłowego wykonania badań:
rodzaj, data i godzina pobrania materiału
gatunek, rasa, płeć oraz wiek zwierzęcia
imię i nazwisko właściciela
dane kontaktowe lecznicy lub lekarza weterynarii
zlecającego wykonanie badań
dokładne dane płatnika (imię i nazwisko, pełna nazwa
firmy, adres, telefon oraz NIP)
8. w piśmie przewodnim należy także wstępnie ukierunkować
badanie i zaznaczyć szczegółowo jakie jest podejrzenie, co
pozwoli laboratorium na dobór właściwej metody badawczej
lub zastosowanie odpowiednich podłoży i warunków hodowli
Zużyty sprzęt i odzież ochronna jednorazowego użytku
powinny być
wyrzucone do wyznaczonego do tego celu, szczelnie
zamykanego pojemnika i
przekazane wyspecjalizowanej jednostce do utylizacji
lub zutylizowane pod
urzędowym nadzorem w gospodarstwie. Miejsce, w
którym pobierano materiał
zakaźny, po zakończeniu tych czynności oczyszcza się i
odkaża, a pozostały
materiał biologiczny i/lub części zwłok zwierząt usuwa
się
w sposób uniemożliwiający szerzenie się choroby,
zgodnie z obowiązującymi
przepisami.
Po starannym zapakowaniu próbki, pojemnik z próbką i
załączonym
pismem przewodnim umieszcza się w kontenerze, mocnym
kartonie lub
pudełku drewnianym i transportuje do właściwego laboratorium
zgodnie z
zachowaniem odpowiednich wymagań czasowych,
temperaturowych, itp.,
Na opakowaniu zewnętrznym kontenera (pudełka), w którym
przewozi
się pobrany materiał biologiczny, należy zamieścić następujące
napisy
ostrzegawcze i informacje:
Materiał biologiczny zakaźny! Nie otwierać podczas transportu!
W sytuacjach szczególnych kontaktować się
z* ......................................................
Podać imiona i nazwiska lub nazwy oraz adresy i telefony nadawcy i odbiorcy.
Wskazane jest, aby osoba odpowiedzialna za pobrane
próbki (Powiatowy
Lekarz Weterynarii lub osoba przez niego
upoważniona), zgłosiła w laboratorium
przewidywaną datę i godzinę dostarczenia próbki,
aktualne swoje dane (imię
nazwisko, adres, telefony itp.), umożliwiające
nawiązanie kontaktu, jeśli okaże
się to konieczne.
Próbki od zwierząt żywych
Pobieranie próbek krwi
Krew jest materiałem biologicznym najczęściej poddawanym
badaniom laboratoryjnym: hematologicznym, serologicznym,
wirusologicznym, bakteriologicznym, parazytologicznym. W każdym
przypadku próbki powinny być pobierane jałowo, a używany sprzęt
powinien być sterylny.
Do testów serologicznych krew pobiera się „na skrzep” (probówka bez
antykolagulantów). W celu pozyskania surowicy, krew pobraną
pozostawia się w temperaturze pokojowej na około 2 godziny. Po
wydzieleniu się surowicy skrzep można oddzielić od ścian probówki
sterylną długą igłą, a następnie próbki umieścić w lodówce w
temperaturze 4°C. Po kilku godzinach lub następnego dnia próbki można
odwirować – 1000g/10-15min., surowicę zdekantować lub przenieść pipetą
do probówek typu Ependorf.
Do pozostałych wymienionych wyżej rodzajów badań krew pobiera się
do probówek z dodatkiem środków zapobiegających krzepnięciu takich jak
sole heparyny czy kwas etyleno-dwuamino 4-octowy (EDTA). Próbki
pobrane na antykoagulant należy delikatnie wymieszać. Do wykonania
reakcji PCR preferowany jest EDTA.
Pobieranie próbek kału
Kał do badań powinien być świeżo oddany lub pobrany
bezpośrednio z prostnicy.
Próbka kału nie powinna być mniejsza niż 10g. Kał do badań
parazytologicznych powinien wypełniać cały pojemnik. Czas
przechowywania i transportu nie powinien przekraczać 24
godzin, a
próbki należy przechowywać i transportować w temperaturze
około 4°C.
Alternatywną i często zalecaną metodą jest pobieranie
wymazów z
prostnicy (albo kloaki u drobiu). Wymazówka w czasie
pobierania musi mieć kontakt z błoną śluzową, a jej
powierzchnia powinna być pokryta kałem. Pobrane wymazy
najlepiej przechowywać i transportować w temperaturze
4°C
.
Pobieranie próbek ze skóry
W chorobach, które powodują powstanie zmian
pęcherzowych należy pobrać z zachowaniem zasad
aseptyki, o ile to możliwe, 2g tkanki nabłonkowej,
nie mniej jednak niż 1g lub o powierzchni 2 cm2 i
umieścić w 5ml buforu fosforanowego z gliceryną w
równych częściach,
albo buforu tris o pH 7,2 – 7,6, najlepiej 7,4.
Z pęcherzy nieuszkodzonych należy pobrać płyn
aspirując go strzykawką i przenieść do sterylnych
probówek. Transportować w temperaturze 4°C.
Pobieranie próbek z układu
rozrodczego
Próbki można pobierać w dwojaki sposób: płucząc
pochwę lub worek napletkowy albo poprzez
pobranie wymazów. Te ostatnie można pobierać
również z szyjki macicy, jak i z samej macicy.
Nasienie pobiera się za pomocą sztucznej pochwy
lub przez sztuczną stymulację prącia.
Do badań przesyła się frakcję bogatą w plemniki.
Do przesyłania wymagane są specjalne podłoża
transportowe.
Pobieranie próbek z oka (worka
spojówkowego) i jamy nosowej
Próbki pobiera się w sposób delikatny z powierzchni
spojówki.
Wymazówki powinny być mocowane na
elastycznych aplikatorach. Ze względów
bezpieczeństwa nie używa się wymazówek z
aplikatorem drewnianym (uchwytem, rękojeścią).
Wydzielinę z nosa pobiera się wymazówką zwilżoną
w podłożu transportowym, a kontakt wymazówki z
wydzieliną powinien trwać około 1 minuty.
Pobieranie próbek mleka
Przed pobraniem próbek mleka należy dokładnie
oczyścić
i wysuszyć strzyk i ujście kanału strzykowego bez
używania środków dezynfekcyjnych.
Pierwsze strumienie mleka należy usunąć, a następne
pobrać do pojemnika (probówki).
Do wykonania niektórych testów można pobierać z
jednego
gospodarstwa mleko zbiorcze.
Mleko do testów serologicznych nie może być
zamrażane,
podgrzewane, czy też gotowane jak też poddawane
gwałtownemu wytrząsaniu. Jeżeli przesłanie próbek do
laboratorium opóźni się, można dodać środek
konserwujący.
Próbki do badań bakteriologicznych, jeżeli jest
to konieczne, można
zamrażać.
Próbki od zwierząt martwych (próbki
post-mortem)
Sprzęt niezbędny do sekcji zależy od wielkości i gatunku
zwierzęcia,
ale zazwyczaj niezbędne są: nóż, piła, topór, skalpele,
kleszcze, pęsety, nożyczki, w tym również z jednym
ramieniem tępym do otwierania jelit.
Narzędzia do pobierania próbek powinny być jałowe.
Przeprowadzający badanie musi posiadać wystarczającą ilość
kontenerów, pojemników z podłożami transportowymi dla
określonych próbek i kierunków badań. Niezbędne jest
posiadanie i używanie w czasie sekcji odzieży ochronnej
takiej jak: kombinezony, fartuchy, rękawice i buty gumowe, a
także maski ochronne na twarz i oczy. Te ostatnie są
szczególnie ważne, jeżeli u zwierzęcia podejrzewamy
chorobę odzwierzęcą i istnieje potencjalne ryzyko zakażenia.
Próbki środowiskowe
Próbki środowiskowe mogą być pobierane w celu
monitorowania higieny w miejscu przebywania zwierząt
albo mogą stanowić element nadzoru nad drogami
rozprzestrzeniania się choroby.
Pobieranie próbek środowiskowych jest szczególnie
ważne w zakładach wylęgowych, stacjach
unasienniania oraz rzeźniach.
Najczęściej pobieranym materiałem jest pomiot albo
ściółka, świeży kał.
Wymazy pobierane są też z powierzchni przewodów
wentylacyjnych, urządzeń do karmienia i pojenia
zwierząt. Pasza może być pobierana z urządzeń do
karmienia, jak również z silosów (zbiorników).
Procedury dodatkowe związane z
pobieraniem próbek od zwierząt
Członkowie zespołu pobierającego próbki, przed
przystąpieniem do próbkobrania, powinni
omówić plan czynności, ubrać odzież ochronną,
przeprowadzić dezynfekcję osobistą, a
następnie rozpocząć przegląd stada i badanie
kliniczne zwierząt podejrzanych oraz pobrać
próbki.
Wykonując powyższe czynności należy
zachować szczególną staranność w celu
uniknięcia
rozprzestrzenienia czynnika zakaźnego.
W podejrzanym stadzie przegląd zwierząt gatunków
podatnych
przeprowadza się na podstawie aktualnej księgi
rejestracji znajdującej się w każdej siedzibie stada,
odrębnie dla poszczególnych gatunków zwierząt
oznakowanych i ich numerów identyfikacyjnych (jeżeli
zwierzęta posiadają
indywidualne oznakowanie).
Podczas przeglądu sporządza się wykaz zwierząt
chorych, podejrzanych o chorobę lub o zakażenie, a
także zapisuje się wszystkie objawy chorobowe, które
mogą świadczyć o zakażeniu. Określa się również
miejsca lokalizacji
poszczególnych zwierząt w gospodarstwie.
Przegląd zwierząt rozpoczyna się w pierwszej kolejności od
części,
w której znajdują się zwierzęta uznawane przez właściciela
lub przedstawiciela właściciela za zdrowe. Zwierzęta chore,
podejrzane o chorobę lub zakażenie bada się na końcu
przeglądu. Jeśli zalecenia tego nie można spełnić,
szczególnie gdy stado jest liczne a pomoc
niewystarczająca, przegląd z konieczności rozpoczyna
się od zwierząt podejrzanych o zakażenie, chorobę lub od
chorych.
Zwierzęta przebywające na pastwisku w pobliżu
gospodarstwa zapędza się do pomieszczeń inwentarskich.
Zwierzęta przebywające na pastwisku z dala od
gospodarstwa, gromadzi i bada się na pastwisku,
szczególnie, gdy zachodzi obawa, że w czasie ich
przemieszczania do obór mogłoby zwiększyć się ryzyko
rozprzestrzeniania czynnika zakaźnego, zainfekowania
innych zwierząt lub środowiska.
W celu zmniejszenia stresu zwierząt możliwe jest
zastosowanie środków uspokajających oraz, jeżeli jest to
wskazane, miejscowego znieczulenia.
Uspokojenie i znieczulenie korzystnie wpływa zarówno na
bezpieczeństwo obsługi jak i zwierząt. Zmniejsza również
zagrożenie dla obsługi podczas badania klinicznego, a
przede wszystkim umożliwia: dokładne badanie i ocenę
zmian chorobowych, ocenę i wybór materiału biologicznego
do badań oraz właściwe
pobranie próbek.
Uspokojenie jest szczególnie ważne przy osobnikach
trudnych
do poskromienia oraz sprawiających problemy podczas
badania. Zwierzętom, których nie można schwytać, środek
uspokajający w iniekcji należy podać przy użyciu lotek
wyrzucanych z broni pneumatycznej.
Poza sporządzeniem protokołu pobrania próbek,
każde zwierzę, od którego została pobrana próbka należy oznaczyć
łatwo
dostrzegalnym znakiem np. farbą w aerozolu, aby można było je
łatwo odszukać, jeśli konieczne będzie powtórne pobranie
próbek.
Po zakończonym badaniu klinicznym i pobraniu próbek wszyscy,
którzy
brali w tych działaniach udział, powinni dokładnie zdezynfekować
ręce,
narzędzia, najbliższe otoczenie i odzież ochronną. Odzież po
zdjęciu należy
umieścić w podwójnych workach foliowych, worki dokładnie
zamknąć, a ich
powierzchnie zewnętrzne zdezynfekować i przekazać
wyspecjalizowanej firmie do utylizacji lub zutylizować pod
urzędowym nadzorem
w gospodarstwie.
Uwaga! Jeśli podejrzenie choroby zostanie potwierdzone, zaleca się
aby
członkowie zespołu pobierającego próbki przez trzy dni unikali
kontaktów ze
zwierzętami podatnymi oraz nie przebywali w miejscach
gromadzenia się takich zwierząt.
koniec