HODOWLE

PERIODYCZNE I

CIĄGŁE

DROBNOUSTROJÓ

W

Jaskóła Karolina
Kiszka Eunika
Kusak Julia

1

ACINETOBACTER SP.

 bakteria tlenowa

 Gram ujemna

 nie wytwarza rzęsek ani
endospor.

 małe wymagania odżywcze,

 różnorodne mechanizmy
oporności
na antybiotyki

 łatwość rozprzestrzeniania się
w
środowisku wodnym

2

WYZNACZENIE KRZYWEJ KALIBRACYJNEJ DO

OZNACZENIA STĘŻENIA FENOLU

y=ax

0

+bx

1

Obliczenia:
x

2

=X

2

-(X)

2

/N  x

2

=1,1

y

2

=Y

2

-(Y)

2

/N  y

2

=0,623

x*y=X*Y-(X* X)/N  x*y=0,828

b= x*y/x

2

Współczynnik b tego równania
wynosił:
b=0,754
przyjmujemy, że a=0.
Więc równanie krzywej ma postać:

y=0,754x

3

KRZYWA KALIBRACYJNA STĘŻENIA

FENOLU

4

czas,

min

A1

A 550 rozc.

c F,

mM

OD

A2

A 550 rozc.

c F,

mM

OD

średni

e

średni

e

A 600

A 600

A 600

c F,

mM

OD

0

0,144

0,062

10

0,80

0,158

0,075

10

0,97

0,151

0,89

60

0,164

0,054

10

0,70

0,182

0,041

10

0,53

0,173

0,62

105

0,146

0,022

5

0,14

0,222

0,01

10

0,13

0,184

0,14

150

0,235

0,017

1

0,02

0,275

0,05

1

0,06

0,255

0,04

195

0,25

0,056

1

0,07

0,336

0,04

1

0,05

0,293

0,06

240

0,322

0,053

1

0,07

0,361

0,08

1

0,10

0,342

0,09

285

0,371

0,026

1

0,03

0,465

0,049

1

0,06

0,418

0,05

330

0,457

0,033

1

0,04

0,579

0,082

1

0,11

0,518

0,07

375

0,596

0,017

1

0,02

0,638

0,093

1

0,12

0,617

0,07

420

0,599  

 

0,624

0,047

1

0,06

0,6115

 

495

0,597  

 

 

0,604  

 

 

0,6005

 

5

Zależność stężenia fenolu oraz

liczby komórek drobnoustrojów od

czasu

6

czas,

min

A1

A 550 rozc.

c F,

mM

OD

A2

A 550 rozc.

c F,

mM

OD

średni

e

średni

e

A 600

A 600

A 600

c F,

mM

OD

0

0,152 0,153

10

1,99

0,162

0,142

10

1,84

0,157

1,91

60

0,18

0,131

10

1,70

0,183

0,122

10

1,58

0,182

1,64

105

0,195 0,071

10

0,92

0,202

0,12

10

1,56

0,199

1,24

150

0,217 0,055

10

0,71

0,216

0,072

10

0,93

0,217

0,82

195

0,25

0,086

5

0,56

0,26

0,07

5

0,45

0,255

0,51

240

0,291 0,134

1

0,17

0,262

0,13

1

0,17

0,277

0,17

285

0,34

0,075

1

0,10

0,33

0,061

1

0,08

0,335

0,09

330

0,424

0,07

1

0,09

0,419

0,06

1

0,08

0,4215

0,08

375

0,489 0,064

1

0,08

0,486

0,053

1

0,07

0,4875

0,08

420

0,593

0,511

0,00

0,552

465

0,622

0,622

495

0,617

0,631

0,624

7

Zależność stężenia fenolu oraz

liczby komórek drobnoustrojów od

czasu

8

czas,

min

A1

A 550 rozc.

c F,

mM

OD

A2

A 550 rozc.

c F,

mM

OD

średni

e

średni

e

A 600

A 600

A 600

c F,

mM

OD

0

0,151 0,202

10

2,62

0,138 0,215

10

2,79

0,145

2,71

60

0,127 0,188

10

2,44

0,171 0,183

10

2,38

0,149

2,41

105

0,136 0,128

10

1,66

0,181 0,158

10

2,05

0,159

1,86

150

0,168 0,135

10

1,75

0,195 0,125

10

1,62

0,182

1,69

195

0,198 0,096

10

1,25

0,226 0,098

10

1,27

0,212

1,26

240

0,218 0,134

5

0,87

0,26

0,084

10

1,09

0,239

0,98

285

0,240 0,066

5

0,43

0,301 0,120

5

0,78

0,271

0,60

330

0,283 0,264

1

0,34

0,347 0,209

2

0,54

0,315

0,44

375

0,361 0,082

1

0,11

0,337 0,125

1

0,16

0,349

0,13

420

0,403

0,428 0,096

1

0,12

0,416

0,12

465

0,501

0,501

495

0,536

0,512

0,524

9

Zależność stężenia fenolu oraz

liczby komórek mikroorganizmów

od czasu

10

czas,

min

A1

A 550 rozc.

c F,

mM

OD

A2

A 550 rozc.

c F,

mM

OD

średni

e

średni

e

A 600

A 600

A 600

c F,

mM

OD

0

0,116

0,296

10

3,84

0,153

0,325

10

4,22

0,135

4,03

60

0,122

0,259

10

3,36

0,16

0,312

10

4,05

0,141

3,71

105

0,132

0,259

10

3,36

0,186

0,271

10

3,52

0,159

3,44

150

0,15

0,196

10

2,54

0,19

0,237

10

3,08

0,170

2,81

195

0,165

0,16

10

2,08

0,243

0,19

10

2,47

0,204

2,27

240

0,184

0,134

10

1,74

0,236

0,133

10

1,73

0,210

1,73

285

0,203

0,095

10

1,23

0,266

0,113

10

1,47

0,235

1,35

330

0,239

0,209

5

1,36

0,304

0,108

10

1,40

0,272

1,38

375

0,27

0,136

5

0,88

0,338

0,06

10

0,78

0,304

0,83

420

0,282

0,506

1

0,66

0,387

0

0,335

0,33

495

0,39

0,453

0

0,422

11

Zależność stężenia fenolu oraz

liczby komórek mikroorganizmów

od czasu

12

czas,

min

A1

A 550 rozc.

c F,

mM

OD

A2

A 550 rozc.

c F,

mM

OD

średnie średnie

A 600

A 600

A 600 c F, mM

OD

0

0,133 0,337

10

4,37

0,142 0,395

10

5,13

0,138

4,75

60

0,135 0,318

10

4,13

0,126 0,348

10

4,52

0,131

4,32

105

0,198 0,308

10

4,00

0,139

0,29

10

3,76

0,169

3,88

150

0,165 0,289

10

3,75

0,15

0,175

10

2,27

0,158

3,01

195

0,164 0,213

10

2,76

0,189

0,2

10

2,60

0,177

2,68

240

0,198 0,198

10

2,57

0,232 0,192

10

2,49

0,215

2,53

285

0,21

0,194

10

2,52

0,222 0,184

10

2,39

0,216

2,45

330

0,236 0,171

10

2,22

0,234 0,156

10

2,02

0,235

2,12

375

0,281 0,161

10

2,09

0,307 0,128

10

1,66

0,294

1,88

420

0,33

0,139

10

1,80

0,338 0,116

10

1,51

0,334

1,65

495

0,392

0,393

0,393

13

Zależność stężenia fenolu oraz

liczby komórek Acinetobacter od

czasu

14

Porównanie wzrostu komórek

bakteryjnych w pożywkach o

różnej zawartości fenolu

15

Porównanie spadku stężenia fenolu w

hodowlach bakteryjnych o różnej

początkowej zawartości fenolu

16

Wnioski:



Szczep Acinetobacter sp. rozkłada fenol



Czas rozkładu tego związku zależy od jego stężenia

w środowisku – im wyższe stężenie tym dłuższy jego
rozkład



Związki fenolowe są trwałe i mogą być groźne dla

organizmów żywych.



Umiejętności bakterii do rozkładu fenolu mogą być

wykorzystywane w procesie oczyszczania skażonych

terenów oraz ścieków

.

17

czas [h]

rozcieńczen

ie

CFU

CFU/1ml

Średni

CFU/1ml

log

CFU/1ml

0

10^-4

285

28500000

27833333,33 7,44456522

10^-5

35

35000000

10^-6

2

20000000

1

10^-4

302

30200000

56066666,67 7,74870474

10^-5

38

38000000

10^-6

10

100000000

2

10^-4

372

37200000

36066666,67 7,55710601

10^-5

41

41000000

10^-6

3

30000000

3

10^-5

513

513000000

517666666,7 8,7140502

10^-6

54

540000000

10^-7

5

500000000

4

10^-5

623

623000000

721000000 8,85793526

10^-6

74

740000000

10^-7

8

800000000

5

10^-5

689

689000000

863000000

8,9360108

10^-6

80

800000000

10^-7

11

110000000

0

6

10^-6

111

111000000

0

1370000000 9,13672057

10^-7

20

200000000

0

10^-8

1

100000000

0

CFU/1ml = rozcieńczenie*CFU*10

liczba podziałów:

n= 5,247366

częstość podziałów:

v= 1,749122 [1/h]

wiek osobniczy szczepu:

g= 0,571715 [h]

2

log

log

log

0

N

N

n





t

n

v 

v

n

t

g

1





18

19

HODOWLA

OKRESOWA

DROBNOUSTROJ

ÓW

20

Pomiar

sączka

m.

sączka bakterie

m.

bakterii

[g]

obj. [ml] m.bak.

[kg]

m.bakter

ii [kg/l]

początek

0,0796

0,0824

0,0028

10

0,0000028

0,00028

koniec

0,078

0,0806

0,0026

10

0,0000026

0,00026

21

Zależność stężenia fenolu od

liczby komórek Acinetobacter

od czasu

4 mM Ciągła

22

WNIOSKI:



Hodowla okresowa Acinetobacter rozkłada
fenol i korzysta z niego jako źródło węgla.
Dowodem na to jest spadek stężenia fenolu i
przyrost biomasy bakterii



Ewentualne fluktuacje (wzrost stężenia
fenolu) mogą wynikać z chwilowego
związania fenolu na powierzchni komórki
bakteryjnej

23

Periodyczna

Ciągła

24

Porównanie hodowli o stężeniu 4
mM periodycznej i ciągłej

Wzór:

µ = (1/x

1

) * [(x

2

– x

1

) / (t

2

– t

1

)]

µ - właściwa szybkość wzrostu
x

1

- ilość biomasy w bioreaktorze w czasie t

1

, kg

x

2

– ilość biomasy w bioreaktorze w czasie t

2

, kg

t1 – czas pierwszego pomiaru biomasy, h
t2 – czas drugiego pomiaru biomasy, h

µ = (1/x

1

) * [(x

2

– x

1

) / (t

2

– t

1

)]

µ = (1/ 0,0000028) * [(0,0000026-0,0000028)/

(1,5-0)]
µ = -0,04762 bakterii/h

Ilość bakterii zmalała – maszyna była ustawiona na zbyt

szybkie odprowadzanie biomasy

PRZYROST BIOMASY

OBLICZENIA

25

DZIĘKUJEMY
ZA UWAGĘ ;)

26