KOMPLEKSY

KOMPLEKSY

IMMUNOLOGICZNE

IMMUNOLOGICZNE

Ćwiczenie nr 3
Immunopatologia
2009/2010

Kompleks immunologiczny (KI)

Kompleks immunologiczny (KI)

(łac. complexio - połączenie,
wyrównanie) - kompleks powstały
przez związanie

antygenu

przez

swoiste

dla niego

przeciwciało

Kompleksy immunologiczne

Kompleksy immunologiczne

Cechy nadwrażliwości

Cechy nadwrażliwości

typu III

typu III

Reakcja typu III

- wynik odkładania się KI

w tkankach, co indukuje proces zapalny:



Aktywację i wiązanie układu dopełniacza



Stymulację granulocytów i makrofagów;
uwalnianie cytokin prozapalnych



Interakcje z bazofilami i płytkami krwi
(receptory FcR); uwalnianie amin
naczynioruchowych

NADWRAŻLIWOŚĆ

NADWRAŻLIWOŚĆ

TYPU III wg Coombsa

TYPU III wg Coombsa

Postacie kliniczne:



choroba posurowicza



odczyn Arthusa



reumatoidalne zapalenie stawów



toczeń rumieniowaty układowy



paciorkowcowe kłębuszkowe zapalenie nerek



guzkowe zapalenie tętnic



zewnątrzpochodne alergiczne zapalenie

pęcherzyków płucnych: płuco farmera, płuco

hodowcy pieczarek, płuco hodowcy gołębi



przewlekłe kłębuszkowe zapalenie nerek w

przebiegu tocznia rumieniowatego

Hipotetyczny model rozwoju

Hipotetyczny model rozwoju

nefropatii z udziałem

nefropatii z udziałem

przeciwciał przeciw C1q

przeciwciał przeciw C1q

Kompleksy immunologiczne

Kompleksy immunologiczne

Cechy:



Są usuwane przez układ fagocytów bądź

erytrocyty



Mogą tworzyć się w krwiobiegu i

miejscowo



Dopełniacz ułatwia rozerwanie połączenia

Ag-Ab i utrzymuje KI w stanie płynnym:

- hamowanie ich precypitacji
- rozpuszczanie wytrąconych
- indukcja usuwania przez fagocyty

Kompleksy immunologiczne

Kompleksy immunologiczne

Czynniki sprzyjające odkładaniu KI:



Wielkość

– średniej wielkości są patogenne



Powinowactwo i klasa przeciwciał

–

IgG1/3



Dopełniacz

– niedobory C powodują

powstawanie patologicznych KI



Miejscowe warunki mikrokrążenia

-

zwiększona przepuszczalność naczyń, wzrost

ciśnienia, zapalenie



Specyfika tkanki

- antygeny kationowe,

receptory dla CR1 (kłębuszki nerkowe)

OZNACZANIE KOMPLEKSÓW

OZNACZANIE KOMPLEKSÓW

IMMUNOLOGICZNYCH

IMMUNOLOGICZNYCH

1. METODY FIZYCZNE

1. METODY FIZYCZNE



Wykrywanie krioglobulin

Wykrywanie krioglobulin

-

-

tj

tj

. globulin precypitujących w +4

. globulin precypitujących w +4

0

0

C

C



Precypitacja glikolem polietylenowym

Precypitacja glikolem polietylenowym

(PEG) wg

(PEG) wg

Creightona

Creightona

-

-

wytrącanie białek o dużej masie cząsteczkowej

wytrącanie białek o dużej masie cząsteczkowej



Wiązanie składowej C

Wiązanie składowej C

1

1

q -

q -

wykrywanie dużych KI

wykrywanie dużych KI



Hamowanie aglutynacji cząsteczek lateksu opłaszczonych

Hamowanie aglutynacji cząsteczek lateksu opłaszczonych

agregowaną IgG -

agregowaną IgG -

lateks aglutynuje w obecności C

lateks aglutynuje w obecności C

1

1

q, a w

q, a w

obecności KI nie dochodzi do aglutynacji

obecności KI nie dochodzi do aglutynacji



Pomiar aktywności antykomplementarnej

Pomiar aktywności antykomplementarnej

-

-

związanie C

związanie C

1

1

q

q

przez KI hamuje właściwości hemolityczne układu dopełniacza

przez KI hamuje właściwości hemolityczne układu dopełniacza



Wiązanie C

Wiązanie C

1

1

q met. radioimmunologiczną -

q met. radioimmunologiczną -

jodowany

jodowany

C

C

1

1

q

q

poddaje się

poddaje się

reakcji z badanym płynem, powstałe KI precypitują za

reakcji z badanym płynem, powstałe KI precypitują za

pomocą PEG pomiar radioaktywności w strącie

pomocą PEG pomiar radioaktywności w strącie



Test z komórkami Raji

Test z komórkami Raji

-

-

kom. Raji (linia chłoniaka Burkitta)

kom. Raji (linia chłoniaka Burkitta)

posiadają receptor dla C3, wiąże KI. Wiązanie mierzy się za

posiadają receptor dla C3, wiąże KI. Wiązanie mierzy się za

pomocą jodowanego odczynnika anty- Ig - ocena ilościowa

pomocą jodowanego odczynnika anty- Ig - ocena ilościowa

OZNACZANIE KOMPLEKSÓW

OZNACZANIE KOMPLEKSÓW

IMMUNOLOGICZNYCH

IMMUNOLOGICZNYCH

2. METODY OPARTE NA

2. METODY OPARTE NA

INTERAKCJACH ZE SKŁADOWYMI

INTERAKCJACH ZE SKŁADOWYMI

DOPEŁNIACZA

DOPEŁNIACZA



Test z przeciwciałami anty–C3b

Test z przeciwciałami anty–C3b

-

-

opłaszczone

opłaszczone

przeciwciała wiążą KI, które wykrywane są za pomocą

przeciwciała wiążą KI, które wykrywane są za pomocą

odczynnika anty-Ig techniką radioimmunologiczną lub ELISA.

odczynnika anty-Ig techniką radioimmunologiczną lub ELISA.



Test wiązania konglutyniny

Test wiązania konglutyniny

-

-

(składowa surowicy wołu)

(składowa surowicy wołu)

ma zdolność reagowania z kompleksami C3bi i C3d, które

ma zdolność reagowania z kompleksami C3bi i C3d, które

wykrywane są za pomocą odczynnika anty-Ig techniką

wykrywane są za pomocą odczynnika anty-Ig techniką

radioimmunologiczną lub ELISA

radioimmunologiczną lub ELISA



Test odchylenia (dewiacji C1q)

Test odchylenia (dewiacji C1q)

-

-

zahamowanie wiązania

zahamowanie wiązania

jodowanego C1q

jodowanego C1q

OZNACZANIE KOMPLEKSÓW

OZNACZANIE KOMPLEKSÓW

IMMUNOLOGICZNYCH

IMMUNOLOGICZNYCH

2. METODY OPARTE NA

2. METODY OPARTE NA

INTERAKCJACH ZE SKŁADOWYMI

INTERAKCJACH ZE SKŁADOWYMI

DOPEŁNIACZA c.d.

DOPEŁNIACZA c.d.



Czynnik reumatoidalny

Czynnik reumatoidalny

to przeciwciała klasy IgM,

to przeciwciała klasy IgM,

rzadziej IgG powstające u chorych z RZS. Czynnik ten

rzadziej IgG powstające u chorych z RZS. Czynnik ten

wiąże się z KI, które można wykryć w podwójnej

wiąże się z KI, które można wykryć w podwójnej

dyfuzji w agarze

dyfuzji w agarze



Hamowanie aglutynacji cząsteczek lateksu

Hamowanie aglutynacji cząsteczek lateksu

opłaszczonych agregowaną IgG -

opłaszczonych agregowaną IgG -

cząsteczki

cząsteczki

lateksu reagują z surowicą zawierającą KI, a następnie

lateksu reagują z surowicą zawierającą KI, a następnie

z czynnikiem reumatoidalnym i nie dochodzi do

z czynnikiem reumatoidalnym i nie dochodzi do

aglutynacji

aglutynacji

OZNACZANIE KOMPLEKSÓW

OZNACZANIE KOMPLEKSÓW

IMMUNOLOGICZNYCH

IMMUNOLOGICZNYCH

3. METODY OPARTE NA REAKCJI

3. METODY OPARTE NA REAKCJI

Z CZYNNIKIEM

Z CZYNNIKIEM

REUMATOIDALNYM

REUMATOIDALNYM

Precypitacja glikolem

Precypitacja glikolem

polietylenowym wg

polietylenowym wg

Creightona

Creightona

1. H

2

O

dest.

2. NaOH

1. Bufor

fosforanowy

1. Surowica

badana

2. Bufor boranowy

3. PEG

INKUBACJA

ODCZYT NA

SPEKTROFOTOMETR

ZE

ELEKTROFOREZA

Spektrofotometr

Norma:

0,084 mg/ml

0,1 jednostki odczytu = 0,07 mg/ml białka

Precypitacja glikolem

Precypitacja glikolem

polietylenowym wg

polietylenowym wg

Creightona

Creightona