Śledziona – potencjalne 

źródło nowych wysp w 

transplantacji

Anna Klimaszewska

Biotechnologia III 

grupa 2

 

 

   Transplantacja wysp trzustkowych 

stwarza możliwość zahamowania lub 
wyeliminowania powikłań 
narządowych cukrzycy. Ostatnie próby 
kliniczne dotyczące przeszczepu 
allogenicznych wysp trzustkowych 
odniosły bardzo pozytywne rezultaty: 
rok po operacji 85% dorosłych 
pacjentów było zdolnych do 
utrzymania normoglikemii bez 
konieczności podawania insuliny 
egzogennej.  

 

 

PROBLEM KLINICZNY

 Transplantacja wysp trzustkowych u dzieci jest aktualnie 

ograniczona przez wymóg:    

• długoterminowej  immunosupresji 
• młodego wieku dawców               

 Wymagane jest zatem alternatywne źródło wysp trzustkowych 

pozwalające na przezwyciężenie tych trudności

 

 

Cel doświadczeń

   stwierdzenie czy rozwijająca się śledziona 

ptasich embrionów jest zdolna do 

wytwarzania komórek produkujących 

insulinę (insulin-producing cells IPCs)

   badanie efektu zmian wzajemnego 

stosunku tkanek (śledziony do nabłonka 

trzustki) i całkowitej ilości tkanek u 

rekombinantów

 

Cel 1:

Cel 2 i 3:

 

 

 METODY

 

 

METODY cd.

 Rekombinanty chimerycznych embrionów 

kurczaka i przepiórki zostały skonstruowane 
przez rekombinacje śledziony embrionu 
przepiórki z nabłonkiem trzustki kurczaka

 

 Suma i stosunek mezenchymy śledzionowej do 

epitelium trzustki kurczaka były zmieniane w 
każdym eksperymencie:

w doświadczeniu 1:
 rekombinacja w stosunku 1:1 (12 rekombinantów)

 

 

METODY cd.

w doświadczeniu 2:
rekombinacja w stosunku 2:1 (9 

rekombinantów)

w doświadczeniu 3:
rekombinacja w stosunku 2:2 (5 rekombinatów)

reakcje kontrolne:
pobranie (dzień 0) reprezentatywnych nabłonków trzustkowych
kurczaka i śledziony przepiórek

 

 

METODY cd.

Hodowla in vitro

 całonocna inkubacja rekombinantów w 1% 
agarozie z medium       RPMI 1640 (10% surowica 
płodowa cielęca, 1% L-glutamina, 0,3% 
penicylina/streptomycyna)

siedmiodniowa inkubacja rekombinantów w 
medium RPMI w aparacie do hodowli

Przygotowanie do barwienia

utrwalenie tkanki 4% 
paraformaldehydem

 

 

ANALIZA

 immunohistochemia fluorescencyjna 
• przeciwciała specyficzne dla komórek beta (przeciwciała 

przeciw insulinie świnki morskiej) i komórek przepiórki 
(QCPN mouse anti-quail-specific nucleolar antigen) + 
znakowane wtórne przeciwciała

• skrawki zostały wybarwione DAPI (4',6-diaminoino-2-

fenylindol) 

 mikroskopia fluorescencyjna 
 analiza reakcji kontrolnych
• W celu zidentyfikowania:
     tkanek śledziony przeprowadzono hybrydyzacje in situ 

ze specyficznym markerem rozwojowym tlx-1 (hox-11)

     nabłonka trzustki zastosowano przeciwciała przeciwko 

insulinie 

 

 

WYNIKI

 reakcje kontrolne wypadły negatywnie

 

 

 dośw. 1:

     rekombinując jedną śledzionę przepiórki z jednym 

nabłonkiem trzustkowym kurczaka otrzymano IPC-ty 

pochodzenia śledzionowego u 5 z 12 rekombinantów 

(42%) 

 dośw. 2:
     rekombinując 2 śledzione przepiórek z 1 nabłonkiem 

trzustkowym kurczaka otrzymano IPC-ty pochodzenia 

śledzionowego u 3 z 9 rekombinantów (33%) 

 dośw. 3:
     rekombinacja w stosunku 2:2 - IPC-ty pochodzenia 

śledzionowego u 4 z 5 rekombinantów (80%)

Ogólnie 12 (46%) z 26 rekombinantów zawierało IPC-ty 

pochodzenia śledzeniowego

 

 

    Przykłady morfologii „śledzionowych wysp” 

widzianych w mikroskopie fluorescencyjnym

 

 

WNIOSKI

I.

Wstępne wyniki sugerują, że rozwijające się 
ptasie śledzony mogą różnicować się w IPC-ty 
(46% rekombinantów)

II.

Przy podwajaniu ilości każdej tkanki wzrasta 
proporcjonalnie udział % rekombinantów, u 
których zaobserwowano ten proces 

III.

Stosunek śledzionowej mezenchymy do 
nabłonków trzustki kurczaka nie miał na to 
wpływu

IV.

Śledziona jest potencjalnie idealnym źródłem 
wysp w transplantacji dziecięcej 

 

 

ŹRÓDŁO

The spleen—a potential source of new islets
for transplantation?
Stuart A. Robertson, Autumn M. Rowan-Hull, Paul 

R.V. Johnson 

Paediatric Surgical Research Laboratory, Nuffield 

Department of Surgery, University of Oxford, 

John Radcliffe Hospital,

OX3 9DU Oxford, United Kingdom
Received 8 October 2007; accepted 9 October 

2007