Sprawozdanie

Temat: Ilościowe oznaczenie glikogenu oraz badanie niektórych jego właściwości

Cel: Celem ćwiczenia jest zapoznanie się z podstawową wiedzą dotyczącą budowy funkcji i właściwości glikogenu, jak również poznanie zasad najczęściej stosowanych metod ilościowego oznaczania zawartości tego polisacharydu.

Zasada metody Somongyi i Nelsona. Glukoza uwolniona w wyniku hydrolizy glikogenu redukuje w środowisku alkalicznym obecne w odczynniku miedziowym (Somogyi) jony Cu²⁺ do Cu⁺. Ilość powstałego w reakcji tlenku miedzi (I) oznacza się przy użyciu odczynnika arsenmolibdenowego (Nelsona), który ulega redukcji do błękitu molibdenowego. Natężenie powstałej niebieskiej barwy produktu jest proporcjonalne do ilości wytworzonego Cu₂O, a tym samum do ilości powstałej podczas hydrolizy glikogenu glukozy.

Zasada metody Benedicta. W środowisku alkalicznym jony Cu (II) ulegają pod wpływem glukozy redukcji do Cu (I), z roztworu wypada żółty, pomarańczowy lub ceglastoczerwony osad Cu₂O (I). Z barwy i ilości osadu można w przybliżeniu ocenić stężenie sacharydu w badanym roztworze.

Obserwacje i obliczenia:

A.

Próbka	P1	P2
Absorbancja	0,235	0,235

Z krzywej wzorcowej dla absorbancji 0,235 : 78,33 µg glukozy

z uwzględnieniem współczynnika umożliwiającego przeliczenie stężenia glukozy na stężenie glikogenu: 0,9 * 78,33= 70,497 µg.

Ze schematu rozcieńczeń wynika, że w 1 ml roztworu pobranego do oznaczania jest 79, 497 µg glikogenu, a w 12 ml 845,96 µg glukozy, tyle samo glikogenu jest w 2 ml pobranego roztworu z 10 – mililitrowej kolby. W kolbie miarowej (10ml) jest zatem 4,23 mg glikogenu i tyle samo w 2,5 ml wydanego zadania kontrolnego, więc w 1000 ml:

2,5 ml - 4,23 mg

1000 ml – x mg:

x = 1692 mg = 1,692 g, co odpowiada zawartości glikogenu w 1000 ml przydotowanego roztworu glicerolu technicznego. Ze schematu rozcieńczeń wynika, że w 1000 ml rozpuszczono 2 g glicerolu technicznego, więc

2,00 g – 100%

1,692 g – x%

Czystość glikogenu [%] technicznego wynosi 84,6 %

B.

Stopniowa hydroliza kwasowa glikogenu.

Czas hydrolizy w łaźni wodnej [minuty]	Próbki zawierające wodę (barwa)	Próbki zawierające NaOH 1 M (barwa)
0 [min]	Ciemno niebieski	Brak osadu
5 [min]	niebieski	Mała ilość czerwonego osadu
10 [min]	Jasny niebieski	Mała ilość czerwonego osadu
15 [min]	Bardzo jasny niebieski	duża ilość czerwonego osadu

Hydroliza enzymatyczna glikogenu

Mieszanina – pomarańczowa barwa osadu

Glikogen – klarowny roztwór

Wnioski: W mieszaninie pod wpływem temperatury i HCl, powstają formy cząsteczek, redukujące jony Cu²⁺ do Cu⁺, te natomiast wytrącają się w postaci żółto, pomarańczowego osadu Cu₂O.