HODOWLA KOMÓREK I TKANEK IN VITRO

Hodowla jednowarstwowa
Pojedyncza warstwa komórek rosnących na jakiejś powierzchni.

Hodowla w zawiesinie
Typ hodowli, w której komórki rozmnażają się pozostając zawieszone w płynnej pożywce.

Hodowla pierwotna
Hodowla komórkowa zapoczątkowana z komórek, tkanek lub narządów pobranych bezpośrednio z organizmu.

Metodę hodowli komórek stworzył w 1912r-Carnel. Przez długie lata hodowano tkanki w bardzo skomplikowanych środowiskach złożonych z osocza lub surowicy oraz wyciągu z homogenatu zarodków. Dopiero w 1955r wprowadzono do badań syntetyczne środowiska. Hodowlę tkanek, niezależnie od jej rodzaju, prowadzi się w warunkach jałowych w różnego typu pojemnikach szklanych a częściej w plastikowych , przeważnie to sprzęt jednorazowy. Są one wykonane z plastiku nietoksycznego. Bardzo ważne jest aby naczynia hodowlane jak i pożywki, w których rosną komórki nie zawierały substancji toksycznych. Jałowość hodowli uzyskuje się sterylizując sprzęt i pożywki, pracując w boksach z nadmuchem jałowego powietrza. Pożywki stosowane w hodowli mogą być naturalne lub sztuczne. Naturalne to surowica płodowa cielęca lub osocze oraz wyciągi z różnych tkanek. Wyciągi takie zawierają szereg substancji pobudzających wzrost komórek lub różnicowanie się tkanek. Sztuczne pożywki poza solami mineralnymi zawierają glukozę, aminokwasy, witaminy, zasady purynowe lub piramidonowe. Niektóre linie komórkowe wymagają specjalnych pożywek wzbogaconych określonymi substancjami.

HODOWLA PIERWOTNA
Istnieje bardzo wiele odmian techniki hodowli tkanek. Najprostsza polega na pobraniu fragmentów tkanki z zarodka i rozproszeniu komórek za pomocą trawienia enzymatycznego kolagenozą, sedymentacji komórek na dnie płytki Petriego zawierające odpowiednie środowisko i wstawieniu do cieplarki w której utrzymywane jest kontrolowane ciśnienie parcjalne O2 i CO2. po pewnym czasie na skutek namnażania się, komórki pokryje całe dno płytki, po czym w wyniku zjawiska inhibicji kontaktowej dalej się nie dzielą. Hodowle komórkowe pierwotne można prowadzić dalej, przenosząc hodowane komórki do następnych naczyń hodowlanych. Taki zabieg nazywa się pasażowaniem. Komórki z hodowli pierwotnych uwalnia się z podłoża albo mechanicznie lub trawiąc je krótko trypsyną.

ZASADA HODOWLI TKANEK
Polega na umieszczeniu fragmentów żywych tkanek w środowisku nie krzepnącym najlepiej w osoczu krwi pobranej w idealnie sterylnych warunkach. Najlepiej jest użyć osocza tego samego gatunku. Szybko, celem uniknięcia wysychania pobieramy drobne wycinki z narządu, które chcemy hodować. Wycinki powinny być większe niż 1mm3. pobrany wycinek układamy na szkiełku jałowym i pokrywamy go kroplą osocza. Następnie odwracamy szkiełko ostrożnie kulterą ku wydrążeniu w specjalnym szkiełku podstawowym. Szkiełko nakrywkowe obramowujemy woskiem. Kultera szybko rośnie, wzrost hodowli najlepiej jest obserwować na obwodzie hodowli. Po 2-3 dniach hodowlę należy przeszczepić.