Reakcja
antygen-przeciwciało
Uczestnictwo oddziaływań
międzycząsteczkowych stabilizujących
kompleks Ag-Ab
Reakcja pomiędzy
antygenem a przeciwciałem
charakteryzuje się stałą powinowactwa:
Wartościowość i awidność
Funkcjonalne powinowactwo,
zachłanność= awidność
(ang. avidity)
Wiązanie poliwalentne-wielowartościowe
między Ag-Ab
Reakcja Ag z Ab:
Reakcja swoista
Reakcje krzyżowe
Brak reakcji
Podwójna immunodyfuzja:
Wykrywanie Ag
Wykrywanie
lub/i Ab
reakcji krzyżowych
Pomiędzy antygenami
Metoda wg Mancini
Oznaczania stężenia Ag
" W żelu
agarozowym
znajdują się
Ab;
" do
otworków
nanosi się
Ag
(standard,
próba),
" Płytkę
poddaje się
inkubacji.
Ag można wykryć wykorzystując
różnice w ładunku Ag i Ab
Elektroforeza
przeciwprądowa
Elektroforeza
rakietkowa
Oznaczenia
stężenia Ag
wg Laurella
Zasada immunoelektroforezy:
1. Rozdział elektroforetyczny antygenów:
2. Do rowka dodaje się przeciwciała:
3. Podczas dyfuzji powstaje precypitat:
Wykrywanie i oznaczanie ilościowe Ag
przy użyciu znakowanych ligandów (Ab):
Najczęściej stosowane znaczniki:
1. Pierwiastek promieniotwórczy: J125,
C14, tryt;
2. Enzym: peroksydaza chrzanowa, fosfataza
alkaliczna;
3. biotyna - awidyna
4. Lantanowce
5. Złoto koloidowe
6. Barwniki fluorescencyjne: izotiocyjanian
fluoresceiny lub tetrametylorodaminy
 Reakcje wykrywania antygenu na tkance
Bezpośrednie, pośrednie i amplifikowane:
Warunek:
Do dyspozycji
Musi być
przeciwciało
znakowane
np.: fluoresceiną
Zasada technik fazy stałej wykrywania Ag
przy użyciu przeciwciał i znakowanego ligandu:
Faza stała:
" Polistyren
" Polipropylen
" Nitroceluloza
Ligand:
" Białko A
" Następne Ab
ELISA:
Ang. enzyme linked immunosorbent assay
Ang.blot: plama,
osuszać bibułę
Immunobloting:
3.
1. 2.
1. Rozdział Ag
W SDS-PAGE,
2. Transfer Ag
na nitrocelulozę,
3. Reakcja ze
Znakowanym Ab
4a
4b
4. Wizualizacja
Zależy od typu
Ab-znacznika
Doting
Jako metoda wykrywania reakcji
Ag-Ab:
Ang. Dot, kropka, postawić kropkę
Różni się od blotingu brakiem etapu 1.
tj. rozdziału w żelu poliakryloamidowym
Metody immunologiczne
powinny charakteryzować się:
Wrażliwość (ang. sensitivity): zdolność
do wykrywania jak najmniejszej ilości Ag;
Specyficzność (ang. specificity)
zdolność systemu do pomiaru substancji
nas interesującej
Dokładność (ang. Accuracy) zdolność
do określenia obecnej substancji
Precyzja-odtwarzalność (ang. precision
- reproducibility) powtarzalność wyniku w
tym samym dniu, innych przez różne
osoby.
Więcej wiadomości na ćwiczeniach!