,, Metody przechowywania bÄ…dz
wysuszone zarodniki miesza się drobnoustrojów. Ampułki umieszcza
drobnoustrojów przemysłowych z sypkim materiałem: piaskiem, glebą się najczęściej w aluminiowym
Jednym z najważniejszych kryteriów o odczynie neutralnym, żelem pojemniku umożliwiającym
decydujÄ…cych o wydajnoÅ›ci procesów silikonowym =>mieszanie kontrolowane schÅ‚adzanie 1º na
technologicznych jest zapewnienie stałej wysuszonych komórek stosuje się w minutę.
wysokiej aktywności metabolicznej celu zabezpieczenia przed Rodzaje:
drobnoustrojów produkcyjnych. zwiększeniem ilości H2O w otoczeniu - podłoża minimalne zawierające
Podstawowe cechy genetyczne, czystość komórek, które przy odpowiedniej jedynie składniki niezbędne do
mikrobiologiczna drobnoustrojów muszą być wartości aw komórek mogłyby wzrostu szczepu.
w sposób ciągły kontrolowane a stałość tę zacząć kiełkować i stać się aktywne. - podłoża wzbogacone (stosowane w
zabezpiecza stosowanie odpowiednich metod b) Suszenie pod zmniejszonym procesach biotechnologicznych)
przechowywania szczepów. ciśnieniem w obecności środka zawierające np. melasę, namok
pochłaniającego H2O (P2O5) kukurydziany, serwatkę.
Zasady przechowalnictwa: c) Suszenie w wyniku sublimacji-
· PodstawowÄ… zasadÄ… liofilizacja, to najbardziej
postępowania w zakresie rozpowszechniona metoda Surowce stosowane w
przechowywania przechowywania szczepów, biotechnologii:
drobnoustrojów jest liofilizaty mogą być deponowane w Odpadowe surowce pochodzące z
ograniczenie liczby ciągu kilku lat bez przeszczepiania, różnych gałęzi przemysłu.
przesiewów, które stwarzają metoda ta ma jednak kilka wad: y
ródła C: melasa -50% zawartości
zagrożenie pojawiania się wysoka cena, niska przeżywalność sacharozy, 10-12% suchej masy zw
niekorzystnych mutacji komórek =>i podczas liofilizacji i N, 11-12% sole mineralne, witaminy
spontanicznych (im większa podczas przechowywania. W celu (np. biotyna, tiamina, kwas
liczna przesiewów tym zwiększenia przeżywalności pantotenowy, B6) a także
większe prawdopodobieństwo liofilizowanych komórek stosuje się aminokwasy (np. kwas glutaminowy).
występowania mutacji następujące zabiegi: Melasę stosuję się do produkcji
spontanicznej). Ø Do liofilizacji kieruje siÄ™ kwasów organicznych miÄ™dzy
zawiesinę o dużej gęstości innymi: kwasu cytrynowego i
· Warunki przechowywania
komórek aminokwasów (lizyna, kwas
drobnoustrojów muszą być
Ø Stosuje siÄ™ dodatki substancji glutaminowy)
tak dobrane by następowała
ochronnych: W Europie stosowana jest melasa
całkowita luba prawie
dimetylosulfotlenu (DMSO) buraczana, w Azji i Ameryce melasa
całkowita inhibicja procesów
w stężeniu 5%, glicerol w z trzciny cukrowej o nieco innym
metabolicznych w
stężeniu 10%, odtłuszczone składzie.
przechowywanym materiale.
mleko w stężeniu 20%,
Ważne jest tutaj zastosowanie
sacharoza w stężeniu 10-12%. Najważniejsze zadania
podłoży o tzw.
Proces liofilizacji jest dwuetapowy: przechowalnictwa:
Zrównoważonym składnie, w
Etap I => zawiesinę komórek rozlewa o Niedopuszczenie do
których z
ródła C, N, P,
się po 0,1 mm do maleńkich fiolek z zakażeń
mikroelementów występują w
miękkiego, cienkiego, szkła. Fiolka z o Zapewnienie
odpowiednich proporcjach.
zawiesiną jest zamrażana w stabilności
· Należy zachowywać jak
mieszaninie z suchego lodu z o Stosunkowa duża
najwyższą przeżywalność
metanolem (w praktyce z etanolem); przeżywalnośc
komórek. (komórki
fiolkę w tym czasie poddaje się Podłoża do przechowywania to
najcenniejsze z
ruchowi wirowemu przez co uzyskuje podłoża zrównoważone, czyli podłoże
technologicznego punktu
się odkładając skalę na ściankach o odpowiednim stosunku C: N: P:
widzenia są słabsze i mniej
fiolki cienką warstwę zamrożonej mikro elementów i ma zapewniać
odporne na trudne warunki
zawiesiny. dodatkowo utrzymanie szczepu w
środowiskowe).
Etap II => następuje sublimacja H2O stanie uśpienia (czyli w stanie
· Do przechowywania powinny
w warunkach podciśnienia poniżej minimalnego metabolizmu).
być stosowane proste podłoża
0,1 mm Hg; zaleca się żeby proces Liofilizacja => szczep musi być
zawierające tanie i dostępne
zamrażania przebiegał bardzo szybko pozbawiony wody do 99%
składniki.
(spadek rzÄ™du 1000º na minutÄ™) lub WykÅ‚ad III
Zasady przechowywania:
powoli (1º na minutÄ™). W czasie W biotechnologii stosuje siÄ™ 3 rodzaje
1) Drobnoustroje zarodnikujÄ…ce i
sublimacji należy utrzymywać podłoży hodowlanych:
przetrwalnikujÄ…ce: najkorzystniejsza
temperaturÄ™ -50ºC, w tym etapie 1)podÅ‚oża Å›ciÅ›le zdefiniowane (o
formÄ… przechowywania sÄ… spory w
stosowany jest środek suszący ściśle zdefiniowanym składzie)
hodowlach 1-2 tyg.
(P2O5). 2)podłoża minimalne
2) Drobnoustroje nie tworzÄ…ce spor 
Wszystkie operacje między etapem I i 3)podłoża produkcyjne, kompleksowe
komórki w póz
nej fazie stacjonarnej.
II powinny być prowadzone bardzo Ad. 1)
3) Ważne jest dobranie odpowiedniego
szybko w celu max ograniczenia Sa to podłoża stosowane w procesach
składu podłoża do namnażania
dostępu tlenu. laboratoryjnych, przygotowywane w
drobnoustrojów przed
Po zakończeniu liofilizacji fiolkę oparciu o określone substancje
przechowywaniem ( po
zatapia się pod próżnią, przechowuje przygotowane do celów
przechowywaniu również).
w temp -12ºC; -18ºC lub w mikrobiologicznych i sÄ… to np.
Podłoże I do przechowywania
zamrażalniku. Poziom wilgotności w ekstrakt drożdżowy, peptony
drobnoustrojów to podłoże minimalne
materiale wysuszonym nie powinien (zestawy określonych peptydów). To
uniemożliwjające zbyt obfity
przekraczać 1%. samo dotyczy z
ródła węgla i jest
wzrost komórek.
· Przechowywanie glukoza, skrobia, brzeczka (Malt
Podłoże II stosowane po
komórek w stanie ekstrakt). W podłożach tych mogą
przechowywaniu do uaktywniania
zamrożenia być również stosowane dodatki
szczepu ma skład zdecydowanie
Temperatura poniżej -20ºC do - okreÅ›lonych witamin, aminokwasów
bogatszy aniżeli podło0że minimalne.
196ºC. Komórki powinny być szybko makro i mikro elementów.
zamrażane aby nie powstawały duże Ad2)
kryształy które mogłyby rozerwać W procesach nad optymalizacją
Podstawowe metody przechowywania
komórek i doprowadzić do jej śmierci procesów biotechnologicznych oraz w
szczepów:
(apoptazy). badaniach bÄ…dz
fizjologia
· Pasażowanie- okresowe
Metoda uznawana aktualnie za drobnoustrojów stosuję się tzw.
przeszczepianie populacji
najbardziej zabezpieczającą Podłoża minimalne. Skład tych
drobnoustrojów na świeże podłoże;
przeżywalność drobnoustrojów. podłoży jest ściśle zdefiniowany a
hodowle te prowadzone sÄ…
Metoda kosztowna, ponieważ wszystkie składniki dodawane są w
najczęściej na skosach lub w
wymaga odpowiednich drogich ilościach minimalnych. Skład tych
podłożach płynnych,
urządzeń i instalacji z ciekłym azotem podłoży opracowywany jest na bazie
przechowywanie odbywa siÄ™ w temp
dla uzyskania głębokiego zamrożenia. wybranych cukrów, aminokwasów,
+4ºC rzadziej w temperaturze
Stosunkowo łatwo jest uzyska temp - witamin, makro i mikro elementów.
pokojowej. Niekiedy poleca siÄ™ aby
20ºC jednakże z uwagi na tworzenie Ad3)
powierzchnię kultury pokryć warstwą
się mieszanin eutektycznych(?) Podłoża produkcyjne są stosowane w
płynnej jałowej parafiny
temperatura ta nie jest zalecana, procesach biosyntezy różnego typu
uniemożliwiając w ten sposób dostęp
Korzystne jest natomiast zamrażanie produktów muszą być przede
powietrza do przechowywanych
poniżej -40ºC. wszystkim tanie. A wiÄ™c bazÄ… do ich
komórek.
przygotowania musza być odpadowe
· Przechowywanie w
· Przechowywanie komórek w stanie
surowce przemysłu spożywczego,
temperaturze +4ºC
wysuszenia
papierniczego czy odpadowe
zawiesiny komórek w
a) suszenie można prowadzić pod
produkty ropopochodne.
H2O destylowanej
normalnym ciśnieniem w
Komórki przechowywane musza być
temperaturze pokojowej- najczęściej
wcześniej pozbawione składników
metoda ta stosowana jest dla grzybów
podłoża i zawieszone w H2O
strzępkowych i promieniowców;
destylowanej. Zawiesinę komórek
powolne suszenie prowadzone jest w
mieszczą się w małych najczęściej
temp 25ºC (warunki zbliżone do
plastikowych ampułkach, do których
naturalnych) do wysuszenia ,,na
wprowadza siÄ™ po 1ml
wiór . Niekiedy wysuszone komórki