Biochemia  sprawozdanie 7
·ð 8.2.1. Oznaczanie aktywnoÅ›ci ²-amylazy metodÄ… Noeltinga i Bernfelda w
ziarnie pszenicy
Øð Opis doÅ›wiadczenia
üð 1 g zeÅ›rutowanego ziarna pszenicy (oraz jÄ™czmienia, pszenżyta i owsa w
osobnych próbach) zalewamy 200 cm3 wody destylowanej
üð DokÅ‚adnie mieszamy, wytrzÄ…samy co 5 minut i po 30 minutach przesÄ…czmy,
wylewajÄ…c pierwsze partie przesÄ…czu
üð 1cm3 wyciÄ…gu badanej ²-amylazy przenieść do probówki umieszczamy w Å‚az
ni
wodnej o temperaturze 20 stopni Celsjusza
üð Dodajemy 1cm3 roztworu badanej skrobi, uprzednio doprowadzonej do
temperatury 20 stopni Celsjusza
üð Po 180 sekundach dodajemy 2 cm3 odczynnika
üð ProbówkÄ™ zanurzamy na 5 minut we wrzÄ…cej Å‚az
ni wodnej
üð OziÄ™biamy pod bieżąca woda i rozcieÅ„czamy 20 cm3 wody
üð Wykonujemy próbÄ™ kontrolna gdzie, zamiast skrobi, używamy 1 cm3 wody.
Najpierw dodajemy odczynnik, potem enzym
üð Porównujemy absorbancjÄ™ otrzymanych wyników z wynikiem z próby
kontrolnej przy użyciu filtru zielonego S53 w kuwetach o średnicy 20 mm
üð WartoÅ›ci ekstynkcji, wyrażone w mg maltozy, odczytujemy z krzywej
wzorcowej w sposób następujący;
·ð Do 2 cm3 roztworu, zawierajÄ…cego maltozÄ™ w iloÅ›ci od 0,2-2 mg dodajemy 2
cm3 odczynnika
·ð Mieszaniny umieszczamy na 5 minut we wrzÄ…cej Å‚az
ni wodnej, ochładzamy,
rozcieńczamy 20 cm3 wody
·ð Porównujemy na fotokolorymetrze z próbÄ… kontrolnÄ…
Øð Obserwacje
Pod wpływem gotowania roztwory zmieniły barwę, w skali od jasno-pomarańczowego po
bardzo ciemny brąz. Ciemniejszą barwę zaobserwowaną przy większym stężeniu maltozy.
Øð Wzory
Øð Tabela i obliczenia
Stężenie maltozy T T T
1 2 średnie
Lp.
[mg/cm3] [%] [%] [%]
Próba kontrolna 0 0 0 0
1. 0,2 0,04 0,04 0,04
2. 0,4 0,12 0,09 0,105
3. 0,6 0,21 0,22 0,215
4. 1,2 0,38 0,37 0,375
5. 1,6 0,57 0,5 0,535
6. 2,0 0,74 0,59 0,665
http://notatek.pl/oznaczanie-aktywnosci-amylazy-w-pszenicy?notatka
Wartości transmitancji dla;
pszenica- 0,63 -> 1,875
jęczmień- 0,18 -> 0,275
pszenżyto- 0,27 -> 0,8
owies- 0,27 -> 0,8
Obliczenia;
1 cm3 przesÄ…czu  5 mg mÄ…ki
200 cm3 przesÄ…czu - 1000 mg mÄ…ki
1,875 mg maltozy  1 cm3 przesÄ…czu
375 mg maltozy  200 cm3 przesÄ…czu
0,275 mg maltozy  1 cm3 przesÄ…czu
55 mg maltozy  200 cm3 przesÄ…czu
0,8 mg maltozy  1 cm3 przesÄ…czu
160 mg maltozy  200 cm3 przesÄ…czu
Aktywność ²-amylazy wyniosÅ‚a 435,192 mg maltozy na 1 g suchego ziarna pszenicy, 55g dla
jęczmienia i 160 g dla pszenżyta i owsa.
Øð Wnioski
Rozbieżne wyniki w innych grupach świadczą o tym, że wartość dla próby
kontrolnej, oznaczona na fotokolorymetrze, nie jest wartością absorbancji, lecz
transmitancji (wartość dla próby kontrolnej nie została oznaczona jako 100%, lecz
jako 0%).