ENZYMY BAKTERYJNE O ZNACZENIU PRZEMYSŁOWYM
Ćwiczenie 7
Temat:
Izolacja szczepów Bacillus z gleby.
Zagadnienia teoretyczne:
charakterystyka bakterii z rodzaju Bacillus
charakterystyka spor wytwarzanych przez bakterie z rodzaju Bacillus
metody eliminacji bakterii przetrwalnikujących
bakterie patogenne z rodzaju Bacillus
Część praktyczna:
Materiały:
łaźnia wodna
próbka gleby
kolbki z 90 ml jałowej soli fizjologicznej
pipety sterylne 1 ml, 2 ml, 5 lub 10 ml
pipety automatyczne, końcówki
probówki z solą fizjologiczną do szeregu rozcieńczeń
płytki agarowe
głaszczka
denaturat
Procedura:
Izolacja szczepów Bacillus z gleby:
napełnić łaźnię wodną do połowy objętości i podgrzać do osiągnięcia temperatury 80oC.
próbkę gleby w warunkach sterylnych dodać do kolbki z 90 ml jałowej soli fizjologicznej, wytrząsać intensywnie przez 10 minut (otrzymane w ten sposób rozcieńczenie to 10-1).
próbę pozostawić na 10 min w celu sedymentacji makrocząstek glebowych,
po zsedymentowaniu próbki wykonać kolejne rozcieńczenia (od 10-2 do 10-4) w probówkach z 9 ml soli fizjologicznej.
Przygotowane rozcieńczenia roztworu glebowego umieścić w gorącej łaźni wodnej (<800C) na 10 minut. Upewnić się, że poziom wody w łaźni jest wyższy od poziomu roztworu w probówkach. Jest to ważne ze względu na konieczność równomiernego ogrzania próbki.
podgrzane próbki schłodzić do temperatury pokojowej
z przygotowanych, schłodzonych roztworów wykonać posiew metodą płytek mazanych (na płytki Petriego z zestalonym podłożem stałym bulion agarowy nanieść po 0,1 ml z rozcieńczeń 10-2- 10-4).
inkubować płytki przez 7 dni.