mleko ćw5

Mleko

Ćw. 5

18.03.2008r

Dr. Paszkiewicz

Substancje hamujące w mleku.

Substancje hamujące- pozostałości w mleku leków w tym antybiotyków, śr. myjących, dezynfekcyjnych oraz innych związków które hamują wzrost szczepów bakterii używanych do ich wykrywania met. mikrobiologicznymi.

Konsekwencją obecności ich w mleku są sytuacje dotyczące konsumenta i produktu.

możliwość wystąpienia alergii, anemii hemolitycznej lub ewentualnych zatruć u ludzi spożywających mleko zawierające substancje hamujące szczególnie zaś antybiotyki.
wzrost lekooporności bakterii chorobotwórczych
zafałszowanie jakości mleka poprzez hamowanie rozwoju i wzrostu bakterii
uniemożliwienie lub utrudnienie produkcji serów dojrzewających, twarogów i mlecznych napojów fermentowanych.

Wg. Norm Rady i PE|

Kontrola w mleczarni, protokół urzędowego lek. wet., on kontroluje właściciela i przedsiębiorcę.

Metody wykrywania subst. hamujących.

Mikrobiologiczne (dyfuzyjne)

Najstarsza metoda, nadal jest metodą odwoławczą.

Szczep testowy -Bacillus stearothermophilus var. calcidolactis (C953) (ATTC 10149)

Zahamowany wzrost= obecność subst. hamujących

Podłoża: komercyjne

bulion + glukoza
barwnik (purpura bromokrezolowa)
zarodniki Bacillus... (2x10⁶ w 1ml podłoża)

Do badania mleko musi być o prawidłowej kwasowości. Nie może być nakwaszone (wyniki ujemnie fałszywe) Norma 6-7,5 ºSH (kwasowość)

Dyfuzyjna metoda płytkowa

Na płytkę Petriego rozlewamy podłoża, po zastygnięciu nanosimy (technika studzieńkowa, cylinderkowa, krążkowa) próbki badanego mleka. Na każdej płytce nie więcej niż 6 próbek.

Inkubacja 64ºC do 4h.

Można poddać preinkubacji (do 2h) po naniesieniu próbki 2h

Interpretacja: podłoże czyste- przejrzyste, sino-fioletowej barwy. Po inkubacji w miejscu bez subst. hamujących nastąpi zmiana barwy na żółtą, wzrost drobnych kolonii Bacillus. Wokół mleka z subst. hamującymi podłoża pozostają niezmienione.

Na jednej płytce próba ślepa.

Wyniki wątpliwe:

powtórne badanie
dwa wyniki wątpliwe= wynik dodatni

Szybki test dyfuzyjny (STD) (zmiana barwy na żółtą)
Polutest M j.w.
BR-Test (inny barwnik- czerń brylantynowa
Delvotest
Szczep testowy T101 (valio 101) 4,5h Streptococcus termophilus bardzo wrażliwy na antybiotyki (używany do jogurtów)

Metody enzymatyczne- częściej stosowne bo są szybsze.

Test Penenzym (polski produkt licencjonowany) wykrywa tylko antybiotyki β laktamowe

Zestaw:

fiołka a: DD-karboksypeptydaza (penicylinaza)
fiołka b: substrat (polipeptyd)i ortodwuanizydyna(wskaźnik)
fiołka c: peroksydaza, dwunukleotyd flawinodeninowy i oksydaza d-a????
fiołka d: kwas siarkowy rr 50%

Próba barwna dodatni wynik od różu do biało- żółtego wg schematu producenta. Jeżeli nie ma sus. hamujących to różowe, bo penicylinaza rozkłada substrat (D-alanina), ona jest rozkładana przez oksydazę, powstaje duża ilość H₂O₂ i on utlenia wskaźnik i on +kw siarkowy =różowa barwa.

Jeżeli jest antybiotyk to penicylinaza go rozkłada i koniec.

Test Farmerski- łatwiejszy w terenie
Penenzym w wersji tabletkowej (15 minut) nie trzeba stosować kw. siarkowego)

W wypadku wyników wątpliwych zawsze musimy wykonać test mikrobiologiczny.

Testy Elisa (receptorowe) przyszłościowe

β-STAR- antybiotyki β laktamowe 7minut, drogi

Chromatografia, bardzo wysoka czułość (ng/kg), bardzo drogi
Testy Radioimmunologiczne z wykorzystaniem izotopowych znaczników, bardzo czuła metoda, ale szalenie droga
Metoda fotometryczna
Metoda Spektrofotometryczna