Ćwiczenia w pięciu turach :
Piotr Jakimowicz (gr: 1, 3, 5, 7, 9) Agnieszka Ostrowska (gr: 2, 4) Agnieszka Kubiak (gr: 6, 8, 10)
Tura pierwsza: grupy 1 i 2:
Początek w Poniedziałek 7.10.13 godz 9.15 (8-10 godzin)
ul. Joliot-Curie 14a, sala 1.34
1.Omówienie zasad organizacji, tematyki oraz warunków zaliczenia ćwiczeń.
2.Ekstrakcja białek z płuc bydlęcych 0,2 M HCl oraz 0,2 M HCl w obecności NaCl.
3.Prelekcja: Charakterystyka i omówienie procedury oczyszczania BPTI.
4.Wysalanie bialek przy 0,9 nasyceniu (NH4)2SO4.
5.Oznaczanie amidazowej aktywnosci trypsyny wobec BAPNA metoda Erlangera - krzywa standardowa.
6.Oznaczanie ilosci bialka metoda mikrobiuretowa - krzywa standardowa.
7.Wytrącanie białek balastowych w obecnosci 4% TCA.
8.Przygotowanie odczynników wykorzystywanych w kolejnych cwiczeniach.
Wtorek 8.10.13 godz 9.15 (8-10 godzin)
ul. Joliot-Curie 14a, sala 1.34
1.Prelekcja: Chromatografia powinowactwa.
2.Chromatografia powinowactwa preparatu BPTI na immobilizowanej trypsynie.
3.Oznaczanie aktywnosci antytrypsynowej w preparatach uzyskanych w poszczególnych etapach oczyszczania BPTI.
4.Oznaczanie ilosci bialka w preparatach uzyskanych w poszczególnych etapach oczyszczania BPTI.
5.Wykreslenie profilu elucji (A280) bialek zaadsorbowanych na zlozu.
6.Liofilizacja preparatu BPTI uzyskanego w chromatografii powinowactwa na immobilizowanej trypsynie.
Środa 9.10.13 godz 9.15 (6 godzin)
ul. Joliot-Curie 14a, sala 1.34 RP-HPLC i ESI-MS
1. Prelekcja: Chromatografia cieczowa HPLC.
2. Końcowe oczyszczanie i preparatu BPTI
3. Obliczenia i przygotowanie bilansu preparacji.
Czwartek 10.10.13 godz 9.15 (4-8 godzin)
ul. Joliot-Curie 14a, sala 1.34
1.Prelekcja: Sklad aminokwasowy czy oznaczanie masy? - omówienie metod hydrolizy i analizy próbek
2.Analiza składu aminokwasowego BPTI metoda AccQ·Tag.
3. Dokończenie obliczeń i bilansu oczyszczania.
KOLOKWIUM końcowe (1 godz) - termin do ustalenia po zaliczeniu sprawozdań.
(druga tura grupy 3 i 4 analogicznie) początek w poniedziałek 14.10.13.
(trzecia tura grupy 5 i 6 analogicznie) początek w poniedziałek 21.10.13.
(czwarta tura grupy 7 i 8 analogicznie) początek w poniedziałek 28.10.13.
(piąta tura grupy 9 i 10 analogicznie) początek w poniedziałek 4.11.13.
obowiązuje skrypt do ćwiczeń pod redakcją prof. Polanowskiego