Mikrobiologia przemysłowa
Ćwiczenie 13 Kolorymetryczne oznaczanie zawartości kwasu mlekowego w kiszonkach
Materiały: sok z kiszonej kapust, woda z ogórków kiszonych (po 20 ml), odczynnik A (98.75g BaCl2 x 2H2O w 1 litrze wody destylowanej), odczynnik B (0.66M NaOH), odczynnik C (225 g ZnSO4 w 1 litrze wody destylowanej), odczynnik D (5.0 g FeCl3 x 6H2O rozpuścić w 12.5 ml 1M HCl i uzupełnić wodą do 100 ml), r-r kwasu mlekowego (0.1 g/ml)
1 ml płynu poferementacyjnego przenieść do probówki i uzupełnić do 10 ml wodą destylowana.
Z rozcieńczonego płynu pofermentacyjnego pobrać 1 ml i przenieść do kolejnej probówki, dodać 1 ml odczynnika A. wymieszać.
Do roztworu w drugiej probówce dodać 1 ml roztworu B i ponownie wymieszać.
Kolejno dodać 0.5 ml odczynnika C, wymieszać i odsączyć grawitacyjnie na sączku bibułowym.
Rozcieńczyć woda destylowana odczynnik D w stosunku 1:5
Do 1 ml uzyskanego filtratu dodać 1 ml rozcieńczonego odczynnika D
Objętość roztworu uzupełnić wodą dest. Do 10 ml.
Mierzyc absorbancje roztworów przy długości fali 410 nm. (Pomiar musi nastąpić przed upływem 30 min od dodania odczynnika D)
Wg powyższego schematu przygotować 3 próby:
dla soku z kapusty
dla wody z ogórków
próba odnośnikowa (zamiast płynu pofermentacyjnego woda destylowana)
Podać zawartość kwasu mlekowego w badanych kiszonkach.
Przygotowanie krzywej wzorcowej.
Przygotować korzystając z roztworu kwasu mlekowego roztwory (1ml) o stężeniach: 0.0, 0.5 x 10-3 g, 1.5 x 10-3 g, 2.5 x 10-3 g, 3.5 x 10-3g, 5 x 10-3 g (probówki szklane)
Do przygotowanych roztworów dodać odczynniki A,B,C analogicznie do powyżej opisanej metody.
Roztwory odsączyć grawitacyjnie na sączku bibułowym.
Do 1 ml uzyskanego filtratu dodać 1 ml rozcieńczonego odczynnika D
Objętość roztworu uzupełnić wodą dest. do 10 ml.
Mierzyc absorbancję roztworów przy długości fali 410 nm wobec próby odnosnikowej. (Pomiar musi nastąpić przed upływem 30 min od dodania odczynnika D)
Wykreślić krzywą wzorcową – zależność ilości kwasu mlekowego od absorbancji