Kowalczyk Justyna 9-10.04.2015r
Mikrobiologia dla OŚ prowadzący: dr Wójcik Kinga
Grupa: M2

Numer zajęć : 6
Temat zajęć: Wykrywanie enzymów zewnątrzkomórkowych i produktów metabolizmu bakterii

Ćwiczenie 1
Temat ćwiczenia: Wykrywanie produkcji enzymów zewnątrzkomórkowych przez mikroorganizm.

Plan ćwiczenia:
1. Na płytki z podłożem agarowym wysiano promieniście po 4 szczepy.
2. Hodowle inkubowano przez noc w temperaturze 36 C
3. Następnego dnia powierzchnie płytek zalano cienką warstwą odpowiedniego odczynnika
( skrobia - płyn Lugola; DNA - HCl; tłuszcz - CuSO4 ) i pozostawiono na kilka minut
4. Odczytano strefy przejaśnienia

Bakteria	E. coli	S. marcescens	M. luteus	S. aureus	B. subtilis	B. turingensis	P. aerugonosa	G. stearothero - philus	K. pnumonidae
Mleko	++	++	+ żółty	++ żółta	++	++	+++ zielona	+++	-
T20	+	+ S	+	+ S	+	+	+ zielona	+	+
T80	+	+ S, różowy	+ żółty	+ S	++	++	+++ zielona	+++	+
Skrobia	Brak widocznego rozkładu bakterii, wynika to ze złego inkubowania
Tłuszcz	+ O	+ niebiski, O	+ żółty, O	++	++ O	++ O	++ S,O, zielona	++ O	+++
DNA	+	++ S	+ żółty	+ zółta	++ S	+	+ czerwona, S	++	-

Wyniki:

gdzie: +++ b. duża kolonia; ++ duża kolonia; + pojedyncze kolonie; - brak kolonii S – wyst. strefy wzrostu
O – odbarwienie

Wnioski:
Niektóre drobnoustroje takie jak na przykład: S.marcescens czy P. aerugonosa wytwarzają enzymy, które rozkładają każdy z substratów.

ROZKŁAD MLEKA: $\text{Kazeina\ }\frac{\text{peptonizacja}}{\text{en}\text{zymy\ proteolityczne\ }} > widoczne\ przejrzyste\ strefy\ wokol\ lini\ wzrostu\ bakterii$

ROZKŁAD BIAŁEK

ROZKŁAD TŁUSZCZÓW

Ćwiczenie 2
Temat ćwiczenia: Fermentacja cukrów przez bakterie.

Plan ćwiczenia:
1. Do zestawu podłoży bulionowych cukrowych wysianą ezą wybrany szczep bakterii.
2. Inkubowano przez noc w cieplarce.
3. Zaobserwowano zmianę koloru.

Wyniki:

Bakteria	E. coli	S. marcescens	E. faecalis	K. pneumonidae	P. aeruginosa
MANN	- (gaz)	+ (gaz)	+\- (b.dużo gazu)	+ (dużo gazu)	+
GLU	+ (gaz)	+	+ (gaz)	+ (b.dużo gazu)	+
SACH	+	+ (gaz)	+ (gaz)	+ (gaz)	+
LAK	-	+ (gaz)	+ (dużo gazu)	+ (gaz)	+
MAL	+	+	+\- (b.dużo gazu)	+ (gaz)	+

gdzie: + kolor żółty, rozkład cukrów; - kolor fioletowy, brak rozkładu

Wnioski:
Najlepiej cukry rozkładają K. pneumonidae , E. faecalis i S. marcescens. Pierwsze dwa przykłady drobnoustrojów przy rozkładzie wydziela dodatkowo gaz.

Ćwiczenia 3
Temat ćwiczenia: Oddychanie bakterii. - Test na redukcję azotanów.

Plan ćwiczenia:
1. Zaszczepiono poszczególne podłoża bulionowe z azotanem hodowlami bakterii.
2. Inkubowano przez noc w cieplarce.
3. Na następny dzień przeniesiono po 1 ml hodowli do nowej próbki, a następnie dodano do każdej z nich kroplę odczynnika A i kroplę odczynnika B.
4. Zaobserwowano zmiany.

Wyniki:

Bakteria	E. coli	S. marcescens	P. aeruginosa	G. stearothermo - philus	B. turingensis	S. aureus
Zabarwienie	+	+	-	+	+	+

gdzie: + zabarwienie czerwone; - brak zmian

Wnioski:
O reakcji pozytywnej tj. o zdolności rozkładaniu azotanów przez enzymy bakteryjne świadczy czerwone zabarwienie. Tylko w przypadku P. aeruginosa nie zaobserwowano zmian ponieważ azotany zostaly zredukowane do N₂ I N₂0

$\text{NO}_{2}\frac{_{}^{+}e\ + \ 2H^{+}}{} > NO + \ H_{2}O$

$2NO\ \frac{_{}^{+}{2e} + \ {2H}^{+}}{} > \ N_{2}O + \ H_{2}O$

$N_{2}\text{O\ }\frac{_{}^{+}{2e} + \ {2H}^{+}}{} > \ N_{2} + \ H_{2}O$

Natomiast zmiana barwy bulionów w pozostałych próbówkach świadczy o pozytywnej reakcji i redukcji azotanów do azotynów.
$NO_{3}^{-}\ \frac{_{}^{+}{2e} + \ {2H}^{+}}{} > \ NO_{2} + \ H_{2}O$

Ćwiczenia 4
Temat ćwiczenia: Oddychanie bakterii. - Test na produkcję oksydazy

Plan ćwiczenia:
1. Na paski testowe nałożono za pomocą ezy hodowlę wybranego szczepu bakterii wysianej na mleku.
2. Odczekano 5 minut i obserwowano zmianę koloru.

Wyniki:

Bakteria	B. subtilis	E. coli	P. aeruginosa	S. aureus
wynik testu	-	-	+	-

gdzie: + wynik pozytywny tj. zmiana zabarwienie na kolor granatowy; - wynik negatywny tj. zmiana zabarwienia na kolor zielony

Wnioski:
Test ten tylko w przypadku P.aeruginosa wyszedł pozytywnie a u reszty szczepów bakterii negatywnie. Natomiast w przypadku B. subtillis wynik powinien wyjść pozytywnie jednak tak się nie stało ponieważ niektóre szczepy wychodzą właśnie w takich testach negatywnie jak i u nas.