Pojęcie wzrostu drobnoustrojów określa zarówno powiększenie się rozmiarów poszczególnych komórek drobnoustrojów wskutek procesów biosyntezy, jak i ilościowy przyrost komórek w hodowli. Typ wzrostu danego drobnoustroju zależy nie tylko od właściwości fizyczno-chemicznych podłoża oraz jego natleniania, a także od rodzaju prowadzenia hodowli (hodowla, statyczna, hodowla ciagła, hodowla wstrząsana..itd.). Dla celów diagnostycznych przyjmuje się określenie typu wzrostu w hodowlach statycznych, ponieważ zarówno wstrząsanie, jak i napowietrzanie hodowli zdecydowanie zmienia warunki rozwoju mikroorganizmów, rozbijając przede wszystkim większe skupiska komórek. W homogennej zawiesinie drobnoustrojów określać można liczbę komórek, natomiast w zawiesinie niehomogennej ich masę. Ilość drobnoustrojów wyraża się liczbą komórek w 1 cm3, a masę komórek w g/dm3. W hodowli drobnoustrojów nie ma ścisłej zależności między wzrostem liczby komórek , a wzrostem biomasy, dlatego należy oznaczać obie te wielkości. Do oznaczenia wzrostu drobnoustrojów opracowano metody bezpośrednie i pośrednie.
Wzrost drobnoustrojów przygotowaliśmy korzystając z metody płytkowej oznaczania ilości komórek. Przy wykorzystaniu tej metody dążyliśmy do tego żeby z pojedynczych komórek wyrosła kolonia pochodząca od 1 komórki macierzystej określonego gatunku. Na płytki Petriego z agarem odżywczym wydozowaliśmy po 0.1dm3 drożdży, następnie rozprowadziliśmy je po całej płytce za pomocą zagiętej bagietki, uprzednio odkażonej w denaturacie i opalonej nad palnikiem gazowym. Tak wykonany zasiew zainkubowaliśmy w lodówce ustawionej na temperaturę 30C na okres dwóch tygodni.
Po tym czasie zauważyliśmy że kolonie zmniejszają swoją liczebność wraz z postępującym rozcieńczeniem roztworu bazowego. Na próbkach od 102do 104 widzimy bardzo dużo kolonii, co uniemożliwia nam obliczenie ich ilości. Kolonie o małej wielkości, usiane bardzo gęsto.
Optymalne jeżeli chodzi o obserwacje i policzenie są płytki o rozcieńczeniach 105, oraz 106. Kolonii jest dosyć dużo, ale dzięki temu że są duże i dosyć daleko od siebie położone, są policzalne.
Płytki o rozcieńczeniach 107 i 108 nie mogą być brane pod uwagę z powodu bardzo małej ilości, lub całkowitego braku kolonii.
Część praktyczna
$$L = \frac{C}{N_{1} + 0.1N_{2}}*d$$
C- suma kolonii na wszystkich płytkach wybranych do liczenia
N1- Liczba płytek z pierwszego liczonego rozcieńczenia
N2- liczba płytek z drugiego liczonego rozcieńczenia
d-wskaźnik rozcieńczenia odpowiadający pierwszemu(najniższemu) liczonemu rozcieńczeniu
Lp |
Rozcieńczenie | Liczba kolonii |
|---|---|---|
| 1 | 105 |
185 |
| 2 | 105 |
295 |
| 3 | 106 |
68 |
| 4 | 106 |
59 |
Dane:
C=607
N1=2
N2=2
d=105
$$L = \frac{607}{2 + 0.1*2}*10^{5}$$
L=$\frac{607}{2.2}*10^{5}$
L=275,9*105
L=27590000
Komora Thoma
Po obliczeniu poprzedniego zadania, następne doświadczenie polegało na policzeniu komórek hemacytometrze. Jest to grube szkiełko podstawowe z wytrawioną siatką o powierzchni 1mm2. Siatka składa się z 400 kwadracików i prostokątów(wyznaczają duże kwadraty) zwane Komorą Thoma. Za pomocą opalonej ezy na środek siatki ostrożnie nałożyliśmy drożdże, następnie przykryliśmy je specjalnym szkiełkiem nakrywkowym.
Ilość drobnoustrojów w 1cm3 liczy się według wzoru:
Ld= a*b*4000*1000
a-średnia ilość drobnoustrojów w 1 kwadracie
b-zastosowane rozcieńczenie
Rozcieńczenie 10
| 13 | 25 | 24 | 7 |
|---|---|---|---|
| 12 | 9 | 17 | 19 |
| 21 | 10 | 15 | 11 |
| 29 | 8 | 5 | 20 |
$$a = \frac{15 + 11 + 5 + 20}{4} = 12,75$$
b=10
12,75*10*4000*1000=510000000 [cm3]
Rozcieńczenie 5
| 60 | 47 | 65 | 72 |
|---|---|---|---|
| 55 | 82 | 50 | 81 |
| 69 | 67 | 66 | 90 |
| 70 | 80 | 88 | 71 |
$a = \frac{65 + 72 + 50 + 81}{4}$= 67
b=5
67*5*4000*1000=1340000000 [cm3]
Ilość drobnoustrojów w 1cm3 dla wszystkich grup
Rozcieńczenie 10
| Grupa I | Grupa II | Grupa III | Grupa IV |
|---|---|---|---|
| 58 | 51 | 20 | 42 |
$$\mathbf{a} = \frac{58 + 51 + 20 + 42}{16} = 10,68$$
b=10
10,68*10*4000*1000=427200000 [cm3]
Rozcieńczenie 5
| Grupa I | Grupa II | Grupa III | Grupa IV |
|---|---|---|---|
| 185 | 268 | 166 | 125 |
$$a = \frac{185 + 268 + 166 + 125}{16} = 46,5$$
b=5
46,5*5*4000*1000=930000000 [cm3]
WNIOSKI
Po przeanalizowaniu wszystkich ćwiczeń zauważalnym jest że stosując coraz większe rozcieńczenia roztworu bazowego liczba drobnoustrojów maleje. Widać też było że na płytkach Petriego im mniejsza ilość komórek (większe rozcieńczenie) tym kolonie są większe i rzadziej rozmieszczone, co pomaga w liczeniu. Moim zdaniem wynika to z tego że im mniej kolonii na płytce tym pojedyncza kolonia ma więcej pożywienia dla siebie. Dzięki temu może urosnąć znacznie okazalsza.