Temat ćwiczenia: Oznaczanie liczby bakterii w zawiesinie.
Cel ćwiczenia: Obliczenie ilość jednostek zdolnych do zakładania kolonii w hodowli.
Wykonanie:
Nalano po 0,9 ml soli fizjologicznej do 7 probówek ependorfa. w pierwszej sporządzono rozcieńczenie 10 krotne zawiesiny bakterii ( Esherichia coli ) w objętości 1 ml. Do Drugiej przeniesiono 0,1ml rozcieńczonej hodowli bakteryjnej i wymieszano, pobrano z probówki drugiej 0,1 ml i przeniesiono do trzeciej itd. Później nakropiono na podłoża agarowe po 50 µl ( pobrane pipetą automatyczną) roztworów z probówek 4-7. Głaszczką rozmazano zawiesiny po powierzchni , aż do wchłonięcia. Następnie inkubowano w cieplarce w temperaturze 37° przez 48h.
Wyniki:
Ilość koloni bakteryjnych na pożywkach
| Numer szalki z agarem | Ilość koloni |
|---|---|
| 6 | 79 |
| 7 | 8 |
Gęstość Hodowli wyjściowej
W każdej kolejnej probówce jest 10 razy mniej jednostek zdolnych do zakładania kolonii więc:
| Numer probówki | Ilość koloni |
|---|---|
| 7 | 8 |
| 6 | 80 |
| 5 | 800 |
| 4 | 8000 |
| 3 | 80000 |
| 2 | 800000 |
| 1 | 8000000 |
| wyjściowa hodowla | 80000000 |
Z hodowli wyjściowej pobrano 0,1ml więc w 1ml było 10 razy więcej.
Gęstość hodowli wynosiła wiec: 800000000 jednostek zdolnych do zakładania kolonii w 1ml bulionu.
Wnioski:
Z wyników przeprowadzonego doświadczenia można wnioskować iż przybliżona ilość jednostek zdolnych do zakładania kolonii w hodowli bulionowej Esherichia coli wynosiła około 8 • 108 cfu/ml.
Temat ćwiczenia: Wpływ ciśnienia osmotycznego na wzrost bakterii.
Cel ćwiczenia: Zbadanie wpływu stężenia NaCl na wzrost bakterii.
Wykonanie :
Na płytki agarowe z dodatkiem NaCl o różnych stężeniach ( 0,5%, 5%, 10%, 15%)wysiano hodowle bulionowe (Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Streptococcus aureus, Serratia marcescens, Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, Staphylococcus saprofiticus, Esherichia coli) za pomocą ezy. Płytki inkubowano w cieplarce w temperaturze 37°C.
Wyniki i wnioski: w tabeli podano także kolory hodowli jakie zaobserwowano
| Bakterie | 0,5%NaCl | 5%NaCl | 10%NaCl | 15%NaCl |
|---|---|---|---|---|
| Staphylococcus epidermidis | +++ | biała | ++ | żółta |
| Pseudomonas aeruginosa | +++ | zielony | ++ | zielony |
| Candida albicans | żółta | biała | ++ | żółta |
| Saccharomyces cerevisiae | ++ | biała | + | kremowa |
| Streptococcus aureus | +++ | biała | ++ | biała |
| Serratia marcescens | +++ | biała | ++ | biała |
| Bacillus subtilis | +++ | biała | ++ | biała |
| Micrococcus luteus | +++ | biała | ++ | biała |
| Staphylococcus saprofiticus | +++ | biała | ++ | biała |
| Esherichia coli | +++ | biała | ++ | lekko biała |
Legenda:
- brak wzrostu
+/- bardzo mała gęstość
+ mała gęstość
++ średnia gęstość
+++ duża gęstość
Wraz ze wzrostem stężeni a zmniejsza się gęstość hodowli. Można wnioskować ze im większe ciśnienie osmotyczne tym słabszy wzrost wykazują hodowle bakterii i grzybów.
Temat ćwiczenia: Wpływ stężenia sacharozy na wzrost bakterii.
Cel ćwiczenia: Zbadanie wpływu stężenia sacharozy w podłożu na wzrost bakterii.
Wykonanie :
Na płytki agarowe z dodatkiem Sacharozy o różnych stężeniach (10, 20, 50) wysiano hodowle bulionowe (18 godzinne) za pomocą ezy. Płytki inkubowano w cieplarce w temperaturze 37°C.
Wyniki i wnioski:
| Bakterie | S 10 | S 25 | S 50 |
|---|---|---|---|
| Staphylococcus epidermidis | +++ | ++ | - |
| Pseudomonas aeruginosa | +++ | ++ | - |
| Candida albicans | +++ | ++ | + |
| Saccharomyces cerevisiae | +++ | ++ | - |
| Streptococcus aureus | +++ | ++ | + |
| Serratia marcescens | +++ | ++ | - |
| Bacillus subtilis | ++ | + | - |
| Micrococcus luteus | +++ | ++ | + |
| Esherichia coli | +++ | ++ | - |
Legenda:
- brak wzrostu
+ mała gęstość
++ średnia gęstość
+++ duża gęstość
Wraz ze wzrostem stężeni a zmniejsza się gęstość hodowli. Można wnioskować ze im większe stężenie sacharozy w podłożu tym słabszy wzrost wykazują badane hodowle bakterii i grzybów.
Temat ćwiczenia: Wpływ temperatury na wzrost bakterii
Cel ćwiczenia: Zaobserwowanie w jakiej temperaturze wzrost jest największy.
Wykonanie:
Na 2 skosy agarowe wysiano za pomocą ezy bakterie Serratia marcescens (z hodowli bulionowej) , jeden skos pozostawiono w temperaturze pokojowej (25°C) a drugi włożono do cieplarki (37°C). Bakterie Serratia marcescens, Esherichia coli wysiano także do 4 probówek z bulionem odżywczym każdą i trzymano w temperaturach 5°C,25°C, 37°C,42°C przez 48h.
Wyniki i wnioski:
Bakterie posiane na skosie agarowy który trzymano w temperaturze 37°C zmieniły barwę na różową, natomiast w temperaturze 25°C nie nastąpiła zmiana barwy. Natomiast gęstość hodowli bulionowych trzymanych w różnych temperaturach przedstawiono w tabeli
| Temperatura | 5°C | 25°C | 37°C | 42°C |
|---|---|---|---|---|
| Gęstość hodowli | Serratia marcescens | - brak wzrostu |
++ | +++ |
| Esherichia coli | - brak wzrostu |
++ | +++ |
Legenda:
- brak wzrostu
+ niewielka gęstość
++ średnia gęstość
+++ duża gęstość
Najlepszą temperaturą do wzrostu bakterii z wymienionych dla tych bakterii jest temperatura zbliżona do temperatury ciała człowieka (37°C), natomiast w temperaturze 5°C nie obserwuje się widocznego.
Temat ćwiczenia: Oddychanie bakterii - wpływ obecności tlenu na wzrost bakterii.
Cel ćwiczenia: Zbadanie w których warunkach ( tlenowe, beztlenowe) wzrost bakterii jest większy.
Wykonanie:
Probówkę z wysokim słupkiem bulionu ogrzano w łaźni wodnej następnie wysiano do niej bakterie Esherichia coli z hodowli bulionowej i zalano płynną parafina. Do próbówki z niskim słupkiem bulionu wysiano bakterie Esherichia coli. obie próbówki inkubowano przez 48h w temperaturze 37°C.
Wyniki i wnioski:
Hodowla z probówki z dostępem tlenu była znacznie gęstsza niż ta z próbówki dostępu tlenu. Świadczy to o tym iż baterie Esherichia coli lepiej rosną w warunkach tlenowych.
Temat ćwiczenia: Wpływ pH na wzrost bakterii.
Cel ćwiczenia: Obliczenie ilość jednostek zdolnych do zakładania kolonii w hodowli.
Wykonanie :
Do szklanych probówek zawierających buliony o różnym pH 5, 7, 9 dodano po 1 kropli 18 godzinnych hodowli. próbówki dla grzybów inkubowano w temperaturze 25°C a dla bakterii w 37°C przez 48 godzin.
Wyniki i wnioski:
| Hodowla | pH= 5 | Ph=7 | pH=9 |
|---|---|---|---|
| Candida albicans | + | +++ | ++ |
| Saccharomyces cerevisiae | + | ++ | ++ |
| Esherichia coli | ++ | ++ | + |
| Micrococcus luteus | + | +++ | ++ |
|
- | ++ | + |
|
+ | ++ | +++ |
Legenda:
- brak wzrostu
+ niewielka gęstość
++ średnia gęstość
+++ duża gęstość
Dla badanych bakterii optymalne pH może być różne np. bakterie Pseudomonas aeruginosa wykazują największy środowisku kwaśnym, a Candida albicans w środowisku obojętnym.