Magdalena Surdyka

OŚ, gr 7

Sprawozdanie nr 2

Oznaczanie zawartości cukrów rozpuszczalnych w tkankach roślinnych metodą antronową

Wykres krzywej wzorcowej

Przygotowano wzorcowy r-r glukozy o stężeniu 1 mg·cm^-3; 5 próbówek w których sporządzono rożne stężenia glukozy (0,2; 0,1; 0;05; 0,025; 0,0125 mg·cm^-3). Do próbówki nr 1 pobrano i wprowadzono 2 cm³ początkowego i uzupełniono 8 cm³ wody. W ten sposób stężenie glukozy w pierwszej próbówce wynosi 0,2 mg·cm^-3. Po zamieszaniu próbówki nr 1 pobrano z niej 3 cm³ r-ru, wprowadzono do próbówki nr 2 i dodano 3 cm³ wody. Uzyskano stężenie 0,1 mg·cm^-3. Kolejne rozcieńczenia zyskano powtarzając tą czynność. Następnie do pięciu nowych próbówek wprowadzono po 1 cm³ rozcieńczonych r-rów. Dodano po 2 cm³ 0,2% antronu w stężonym H₂SO₄, zamieszano na wytrząsarce laboratoryjnej i ogrzewano w temperaturze 90⁰C na łaźni wodnej przez 3 minuty. Po ostygnięciu zmierzono absorpcję spektrofotometrem przy λ=620 nm.

Obserwacje:

Stężenie cukru	absorpcja
0	0
0,2	0,987
0,1	0,380
0,05	0,271
0,025	0,132
0,0125	0,075

Na podstawie tych danych sporządzono wykres krzywej wzorcowej.

Ekstrakcja cukrów rozpuszczalnych

Pobrano 0,5g świeżej masy liścia, utarto w moździerzu w ciekłym azocie. Azot odparowano, dodano 5 cm³ wody. Próbkę gotowało na łaźni wodnej przez 15 minut. Następnie strzępy tkankowe przeniesiono do próbówek wirówkowych i odwirowywano przez 10 minut. Nadsącz zlano i uzupełniono wodą do 10 cm³.

Oznaczenie zawartości cukrów rozpuszczalnych

Pobrano 0,5 cm³ nadsączu r-ru wcześniej przygotowanego, rozcieńczono go 9,5 cm³ wody, wymieszano na wstrząsarce laboratoryjnej, pobrano 2 próbki po 1 cm³ do nowych próbówek. Dodano do nich po 2 cm³ 0,2% antronu w stężonym H₂SO₄, ponownie wstrząśnięto i ogrzewano na łaźni wodnej przez 3 minuty w temperaturze 90⁰C. Po ostygnięciu zmierzono absorpcję spektrofotometrem przy λ=620 nm.

Obserwacje:

Lp.	absorpcja
1.	0,545
2.	0,655

Śr_ABS=0,6

Obliczenia:

Równanie regresji liniowej: y = 4,736x + 0,0011

0,6 = 4,736x +0,0011

x = 0,1263 mg·cm^-3

Odp. Stężenie cukru wynosi 0,1263 mg·cm^-3.

10 × 0,1263 : 05 = 2,526 mg·cm^-3

Odp. W świeżej masie liścia znajduje się 2,526 mg·cm^-3 cukru.

Hydroliza skrobi i próba jodowa

Przygotowano r-r kleiku skrobiowego, 10 próbówek w których znajdowało się po 1 cm³ 0,002% r-ru Lugola. Do kleiku dodano 1 cm³ HCl i ogrzewano na łaźni wodnej. Co minutę pobierano kilka kropel kleiku i przenoszono do wcześniej przygotowanych próbek z płynem Lugola.

W cząsteczce skrobi cząsteczki glukozy tworzą helisy, do których może wniknąć jod i tworzy on fioletowe zabarwienie. Pod wpływem temperatury HCl powoduje rozkręcanie się helis, jod nie może do nich wnikać i każda kolejna próbka ma jaśniejsze zabarwienie.

Obserwacje:

I próbka – zabarwienie intensywnie niebieskie (amylaza)

II – mniej intensywnie niebieskie (amylaza)

III – jasnofioletowa (amylopektyna)

IV – słomkowe (amylopektyna)

W kolejnych brak zabarwienia.

W próbkach I – IV reakcja zaszła bardzo szybko.