1. E. Coli, Enterobacter, laktoza, indol
   Po stwierdzeniu występowania w badanej wodzie bakterii grupy coli należy rozróżnić czy są to bakterie typu fekalnego Escherichia coli czy pochodzenia glebowego Enterobacter aerogenes. Ze wszystkich prób dodatnich (fermentacja laktozy z wytworzeniem kwasu i gazu) wykonuje się badania potwierdzające i identyfikujące bakterie typu fekalnego E. coli. Obejmują one wysiew na pożywkę Endo, ocenę zdolności do fermentacji laktozy (pożywka BLB) w 37 i 44°C oraz testy biochemiczne I, M, V, C. Zaobserwować makroskopowe cechy wzrostu bakterii E. coli i Enterobacter na pożywce Endo. Kolonie bakterii E. coli na pożywce Endo zabarwione na kolor ciemnoczerwony z metalicznym połyskiem, natomiast bakterii Enterobacier aerogenes lekko różowe. Sprawdzić zdolność do fermentacji laktozy w pożywce BLB bakterii E. coli i Enterobacter w temperaturze 37 i 44°C. Wynikiem dodatnim testu jest obecność gazu w rurce Durhama w co najmniej 1/3 objętości. Sprawdzić wytwarzanie indolu (test I) w 24-godzinnej hodowli bakterii w wodzie peptonowej z dodatkiem tryptofanu. Do hodowli dodać kilka kropli odczynnika Kovacsa i wstrząsnąć. Na dodatni wynik testu wskazuje czerwone zabarwienie górnej warstwy hodowli. Sprawdzić własności kwasotwórcze (test MR) bakterii E. coli i Enterobacter aerogenes po 24-godzinnej hodowli w pożywce Ciarka. Dodać 1-2 kropli roztworu czerwieni metylowej obserwować powstałe zabarwienie. Czerwone zabarwienie związane jest ze spadkiem wartości pH poniżej 5, co wskazuje na własności kwasotwórcze bakterii. Sprawdzić obecność acetoiny (test VP) w 24-godzinnej hodowli. Niewielką ilość hodowli bakterii przenieść do płytki porcelanowej, dodać 0.1 cm3 40% roztworu wodnego KOH, szczyptę kreatyny oraz 0.1 cm3 alkoholowego roztworu a-naftolu. Wynik testu odczytać po 10 minutach. Obecność acetoiny wskazuje pojawienie się czerwonego zabarwienia. Sprawdzić wykorzystanie cytrynianu jako jedynego źródła węgla (test C) po 24-72 godzinnej hodowli bakterii Escherichia coli Enterobacier aerogenes na pożywce Simmonsa. Wynikiem dodatnim testu zmiana zabarwienia pożywki z zielonej na niebieską.

2. Organizmy symbiotyczne wiążące azot

   Są to organizmy żyjące wyłącznie w symbiozie z roslinami:

   - RIZOBIA – z rośli. Motylkowymi np. Rhisobium, sinorhisobium

   - SINICE

   - PROMIENIOWCE

3. Asymilatory tlenowe wiążące azot

Asymilatory azotu wolnożyjące wiążące azot – liczba 10⁵ – 10⁸ ; np. Clostridium

1. Metoda sedymentacyjna Koha

   Otwarte płytki z podłożem stałym należy pozostawić na 30 minut na wysokości 1 metra od podłogi. Do pobrania próbek zalecane są płytki Petriego zawierające podłoża wzbogacone, np. Tryptic Soy Agar - TSA, TSA z neutralizatorami, w zależności od potrzeb także podłoża wybiórcze np. Sabouraud. Inkubowacja przez 48 godzin w temperaturze 37°C (TSA) lub przez 10 dni w temperaturze 28°C (Sabouraud). Po tym czasie wyhodowane kolonie należy zliczyć i zidentyfikować ich szczepy.Obliczanie wyników opiera się na założeniu, że w ciągu 5 minut na powierzchni równej 1 m2 osiada tyle drobnoustrojów, ile znajduje się ich w 1 m3 powietrza (w warunkach bezwietrznych i bez przeciągów).

2. Proces nitryfikacji

   pojawiający się w środowisku amoniak - czy to w wyniku procesów geologiczno-atmosferycznych, czy też w wyniku procesów gnilnych i dostarczany przez azobakterie jest przekształcany w jony azotanowe przez bakterie nitryfikacyjne. Proces ten polega w wielkim uproszczeniu na utlenianiu amoniaku do jonów azotynowych i dalej do azotanów.

3. Analiza chem wody wodociągowej

   - badanie pH – papierek wskaźnikowy; 6,5-8,5 to norma
   - spr obec. Azotynów – 1cm3 probki+2 krople α-naftyloaminy+kw. Sulfoniowy – różowa barwa oznacza obecnosc

   - spr obenosci azotanów – 1cm3 probki wody+difenyloamina+stęż siarkowy – niebieski to obecnosc azotanow

   - obecnosc amoniaki – 1cm3 probki + 4 krople Seigenta+odczynnik Nesslera – zółty to obecnosc amoniaku

4. Badanie czystości rąk

   Metodą tamponową – jałowy tampon z gazy zanurzyc w jalowym r-rze soli fizjo, następnie przemyć rękę, przenieść tampon znow do r-ru soli i wyplukać wstrząsajać, czynność powtórzyć dla drugiej dłoni. Z popłuczyn wykonać posiewy na odzywce BLB (w celu spr obecności bakt z grupy coli) oraz na bulionie zespolonym agarem ( zobaczyc ile jest ogolnie drobnoustrojów – liczba)

5. Osad czynny

   Jest żywą zawiesiną bakterii heterotroficznych i pierwotniaków. Jest to kłaczkowata zawiesina zawierająca mikroorganizmy zdolne do prowadzenia: utleniania związków organicznych, nitryfikacji, denitryfikacji, lub wykazujących zdolność do nadmiernego kumulowania fosforu. Są tam zooglea, pseudomonas, bacillus, nitrobacter

6. Metoda zderzeniowa

   polega na przepuszczeniu próbki powietrza przez szczeliny lub otwory, nadające mu prędkość wystarczającą do wydzielenia zanieczyszczeń podczas uderzenia o powierzchnię pożywki znajdującej się na specjalnej, dostosowanej do miernika płytce podobnej do płytki Petriego, np. płytce typu Rodac. Następnie zainfekowaną pożywkę poddaje się inkubacji i zlicza liczbę kolonii. Wadą tej metody jest możliwość zarastania pożywek w przypadku silnego zanieczyszczenia powietrza, a także spadek żywotności drobnoustrojów spowodowany stresem środowiskowym w wyniku nagłego uderzenia mikroorganizmu o pożywkę.Metoda ta nadaje się do kontroli powietrza na zawartość wirusów. Po wypłukaniu i zniszczeniu chloroformem innych mikroorganizmów, wyizolowane wirusy wprowadza się do hodowli komórkowych

7. Morfologia bakterii wiążących azot

   - telnowe asymilatory wolno zyjace w glebie – bakt z rodzaju azotobacter ( takie male kółka po dwa z kropką w srodku – rysunek)

   - beztlenowe – bakt z rodzaju Clostridium ( dlugie cienkie laseczki, takie przecinki na rys)

   - symbiotyczne asym azotu z roslinami motylkowymi np Rhizobium – krótkie pałeczki

8. Drobnoustroje rozkładajace błonnik

   Spr rozkład pasków bibuły, jeśli są brązowe plamy oznacza to obecność bakt Cytophaga sp.

   Wykonać prep odciskowy, barwiony bekitem metylowym.

   Rysunki - formy wegetatywne jak przecinki ; formy spoczyn.jak kuleczki

9. Morfologia Chaetomium i promieniowców

   Chaetomium jest grzybem strzępokowym, na paskach bibuły na pozwyce mineralnej widac oliwkową grzybnie, drobna pojedyncza grzybnia.
   Rysunek: kulka łonowców

   Promieniowce z rodzaju Streptomyces na hodowli płytkowej są białej barwy i maja charakterystyczny zapach
   Rysunek: małe formy cylindryczne

10. Badanie mikrobiologiczne wody wodociągowej

    - obliczyc ogól liczbe mikroorg rosnacych w temp pokojowej w 1cm3 wody (kolonie na plytkach z agarem odzywczym)

    - okreslic liczbe bakterii E.coli metoda FM – kolonie po inkubacji w 37’ z zolta strefa pod filtrem policzyc, wykonac biochemiczne testy potwierdzajace

11. Metoda tamponowa powierzchni płaskich

    . przemyty denaturatem i opalony w płomieniu palnika szablon metalowy o wymiarach 5 x s cm przyłożyć do badanej powierzchni (stół, talerz, fartuch, ściana, itp.). Zmyć dokładnie powierzchnię (5 razy w jednym kierunku i 5 razy w kierunku prostopadłym do poprzedniego) tamponem zwilżonym w jałowym fizjologicznym roztworze soli. Następnie tampon przenieść do probówki z 10 cm3 jałowego fizjologicznego roztworu soli i dokładnie go wypłukać. Tampon wyjąć, dokładnie odcisnąć i usunąć, a następnie z popłuczyn wykonać posiewy jak w punkcie I.1. 2. Badanie czystości sztućców (widelec, łyżka) metodą tamponową. Zwilżonym w jałowym fizjologicznym roztworze soli tamponem zmyć trzykrotnie powierzchnię sztućca. Następnie tampon przenieść do 10cm3 jałowego fizjologicznego roztworu soli, odcisnąć i usunąć. Z popłuczyn wykonać posiewy.

12. Ocena skuteczności dezynfekcji i mycia powierzchni plaskich itd

    1 Policzyć kolonie wyrosłe na płytkach z bulionem zestalonym agarem Uwzględniając objętość fizjologicznego roztworu soli stosowanej do zmywania oraz powierzchnię szablonu (w przypadku powierzchni płaskich) podać liczbę drobnoustrojów na cm2 powierzchni lub na całą badaną powierzchnię. 2. Sprawdzić obecność bakterii grupy coli na badanej powierzchni na podstawie makroskopowych obserwacji pożywki BLB. Obecność gazu w 1/3 objętości rurki Durhama wskazuje na obecność tych bakterii. . 1 Policzyć kolonie wyrosłe na płytkach z bulionem zestalonym agarem Uwzględniając objętość fizjologicznego roztworu soli stosowanej do zmywania oraz powierzchnię szablonu (w przypadku powierzchni płaskich) podać liczbę drobnoustrojów na cm2 powierzchni lub na całą badaną powierzchnię. 2. Sprawdzić obecność bakterii grupy coli na badanej powierzchni na podstawie makroskopowych obserwacji pożywki BLB. Obecność gazu w 1/3 objętości rurki Durhama wskazuje na obecność tych bakterii.

13. Morfologia powietrza

    Wszystkie mikroorganizmy obecne w powietrzu występują w postaci bioaerozoli. Jest to układ złożony z fazy rozpraszającej (powietrze) i rozproszonej (z drobnoustrojami). Faza rozproszona składa się z cząstek wody, substancji organicznych od człowieka i zwierząt oraz cząstek stałych: nasion, pyłków, kurzu, komórek wegetatywnych i przetrwalników bakteryjnych i grzybowych oraz komórek wirusów. Do powietrza drobnoustroje dostają się z gleby, wód, odchodów. Mikrobiota powietrza atmosferycznego jest bardzo różnorodna, wyizolowano ok. 1200 gatunków bakterii i ponad 40 000 gatunków grzybów. Dominują pleśnie (70%), głównie Cladosporium, Alterneria, Aureobasidium, Penicillium, Aspergillus, Mucor, Rhizopus, Fusarium, Geotrichum, Udział ilościowy bakterii wynosi ok 20%. Najczęściej spotykane są bakterie Micrococcus, Achromobacter, Bacillus. Zwykle ok 5% bakterii z powietrza stanowią pochodzące z gleby promieniowce. Drożdże stanowią ok 5% drobnoustrojów z powietrza, głównie rodzaje Rhodotorula, Candida, Saccharomyces.