Ćwiczenie IX

Oznaczanie wymagań pokarmowych bakterii.

1. Źródła węgla

Odżywianie bakterii jest podstawą ich metabolizmu. Bakterie mogą wykorzystywać różne źródła węgla jako źródło energii lub materiał budulcowy. Przyswajalność różnych źródeł węgla zależy od możliwości fizjologicznych poszczególnych drobnoustrojów.

Szczepy bakteryjne:

1. Pseudomonas aeruginosa

2. Staphylococcus albus lub aureus

3. Escherichia coli

4. Proteus vulgaris (na osobną płytkę)

5. Bacillus subtilis

6. Salmonella typhimurium

W/w szczepy bakteryjne wysiej na następujące podłoże stałe

1. agar odżywczy (bulion odżywczy)

2. podłoże GTS

3. podłoże GTS z NH₄Cl

4. podłoże GTS z NH₄Cl + 1% glukozy

5. podłoże GTS z NH₄Cl + 1% laktozy

6. podłoże GTS z NH₄Cl + 1% sacharozy

7. podłoże GTS z NH₄Cl + 1% mannitolu

8. podłoże GTS z NH₄Cl + 1% glicerolu

9. podłoże GTS z NH₄Cl + 1% cytrynianu sodu

10. podłoże GTS z NH₄Cl + 1% octanu sodu

11. podłoże GTS z NH₄Cl + 1% glicyny

12. podłoże GTS z NH₄Cl + 1% lizyny

13. podłoże GTS z NH₄Cl + 1% metanolu

Po inkubacji 24 godz. w 37ºC zaobserwuj wzrost i jego intensywność na podłożach stałych.

Materiały:

Podłoże GTS:

K₂HPO₄ 0,1 g

NaCl 1,0 g

Tris 3,0 g

MgSO₄ 246 g

CaCl₂ 11 g

Na₂MoO₄ 0,27 mg

H₃BO₃ 0,242 mg

MnSO₄ 3,0 mg

ZnSO₄ 2,33 mg

CuSO₄ 0,287 mg

CoCl₂ 0,065 mg

Biotyna 2,0 mg

H₂O 1000 ml

2. Rozkład laktozy na podłożach stałych – pożywki różnicujące z laktozą (stałe): Levina i McConcey´a

Podłoże Levina:

pepton 10 g

K₂HPO₄ 2 g

laktoza 5 g

eozyna (1% r-r wodny) 30 ml

błękit metylenowy (0,2% r-r wodny) 32,5 ml

H₂O 1000 ml

agar 20 g

Drobnoustroje fermentujące laktozę tworzą kolonie intensywnie zabarwione na kolor
czerwono-fioletowy z metalicznym, zielonkawym połyskiem lub czerwonym środkiem. Bakterie nie fermentujące laktozy lub fermentujące ją z opóźnieniem tworzą kolonie przejrzyste o zabarwieniu podłoża .

Podłoże McConcey´a

pepton 17,0 g

laktoza 10 g

dezoksycholan sodu 1,5 g

czerwień obojętna (1% r-r wodny) 3 ml

fiolet krystaliczny (1% r-r wodny) 1 ml

H₂O 1000 ml

agar 17 g

Bakterie fermentujące laktozę dają kolonie różowo-czerwone, otoczone strefą wytrąconego dezoksycholanu sodu, a nie fermentujące laktozy pozostają bezbarwne, przejrzyste.

3. Wysiew na oznaczanie katalazy (dokończenie na ćwiczeniu X)

Szczepy bakteryjne:

1. Pseudomonas aeruginosa

2. Staphylococcus albus lub aureus

3. Escherichia coli

4. Bacillus subtilis

5. Salmonella typhimurium

6. Streptococcus lactis

7. Proteus vulgaris (na osobną płytkę)

W/w szczepy bakteryjne wysiej na stałą pożywkę LB. Po inkubacji w 37ºC dalsze wykonanie,

zgodnie z opisem w Ćwiczeniu X.