Ćwiczenia laboratoryjne I

Temat: Właściwości białek i aminokwasów

Reakcje charakterystyczne białek.

1. Denaturacja cieplna.

Odczynniki i materiał:

- 5% roztwór białka jaja kurzego

- 1% roztwór kwasu octowego

- NaCl

Przygotowanie roztworu białka jaja kurzego:

Białko dokładnie oddzielić od żółtka, dodać około 100ml 2% NaCl i wymieszać.

Wykonanie: w czystej probówce zagotować 5 ml roztworu białka. Następnie oziębić i po zupełnym ostudzeniu płynu dodawać kroplami 1% roztwór kwasu octowego. Tworzy się biały osad wytrąconego białka. Osad jest wyraźniejszy po dodaniu NaCl lub kwasu octowego.

2. Reakcje białek z rozpuszczalnikami organicznymi

Odczynniki i materiał:

- 0,5 % białka jaja kurzego

- NaCl

- 96% etanol

- aceton

Wykonanie: do 3 oznaczonych probówek dodać po 2 ml roztworu białek oraz po

ok. 0,2-0,3 g NaCl i energicznie wstrząsnąć. Następnie dodawać kroplami (1-2ml):

Probówka I: 96% etanol

Probówka II: aceton

Probówka III: woda

Probówki wytrząsać. Obserwować zmiany w probówce przez 3-6 min. Po godzinie można próbować rozcieńczyć strąt wodą.

Zanotować spostrzeżenia.

3. Strącanie białka za pomocą kationów (soli metali ciężkich)

Odczynniki i materiał:

- 0,5 % białka jaja kurzego

- 1% roztwór FeCl₃

Wykonanie: do 2 ml roztworu białka jaj kurzego dodać kilka kropli 1% FeCl₃. Wytrąca się brunatny osad białczanu żelazowego, który rozpuszcza się w nadmiarze odczynnika,

lub

Odczynniki i materiał:

- 0,5 % białka jaja kurzego

- siarczan miedzi

Wykonanie: do 2 ml roztworu białka jaja kurzego dodać kilka kropli siarczanu miedzi. Powstaje jasnobłękitny osad białczanu miedziowego rozpuszczający się w roztworze 0,01M NaOH, dając kolor fioletowy.

4. Strącania białka za pomocą anionów

Odczynniki i materiał:

- 0,5 % białka jaja kurzego

- 20% roztwór kw. sulfosalicylowego

Wykonanie: do 1 ml roztworu białka jaja kurzego dodać kilka kropli 20% roztwór kw. sulfosalicylowego. Zanotować spostrzeżenia.

Reakcje charakterystyczne dla aminokwasów.

1. Reakcja ninhydrynowa

Odczynniki i materiał:

- 1% roztwór glicyny

- 1% roztwór cysteiny

- 1% roztwór proliny

- 0,5% roztwór żelatyny

- 1% roztwór białka jaja kurzego

- 0,1% roztwór ninhydryny w acetonie lub 50% etanolu

Wykonanie:

Do 5 probówek wprowadzić po 1ml przygotowanych roztworów aminokwasów, białka do 6 probówki dodać 1 ml wody. Następnie do wszystkich probówek dodać po 0,5 ml (3-4 krople) 0,1% roztworu ninhydryny. Ostrożnie wymieszać.

Próby ogrzewać we wrzącej łaźni przez 2-3 minuty. Obserwować pojawienie się charakterystycznego zabarwienia. Wszystkie aminokwasy (oprócz proliny ) reagują z ninhydryną dając charakterystyczne niebieskie zabarwienie. Porównać uzyskane wyniki w poszczególnych próbach.

---