Materiały z mikrobiologii |
10 listopada 2007 |
|
Znajduje się tutaj przepisany zeszyt studenta na drogę elektroniczną, mam nadzieje że włożony trud pracy nie pójdzie na marne, dziękuje mojemu koledze który mieszka pode mną za dostarczenie giełdy ( dr Longer) |
Mikrobiologia ogólna |
Bakteria niewidoczny gołym okiem drobnoustrój, niekiedy chorobotwórczy.
Pierwsze bakterie zostały zaobserwowane przez Antona von Leeuwehoeka w 1676r. Nazwa Bakteria została wprowadzona później przez Christiana w 1828r., od greckiego słowa bakterion (laseczka), zdrobnienie od bacteria ( laska).
Podłoże mikrobiologiczne (pożywka mikrobiologiczna)- jest mieszanką odpowiednio dobranych składników tworzących środowisko, w którym szybko i charakterystycznie wzrastają posiane na nie drobnoustroje.
Podłoża bakteriologiczne:
naturalne (nieznany skład chemiczny np.: mleko, krew, mocz) i syntetyczne ( dokładnie znany skład chemiczny)
Płynne, półpłynne, stałe
Proste- do hodowli drobnoustrojów niewybrednych
Wzbogacone (agar z krwią) do hodowli drobnoustrojów o wysokich wymaganiach odżywczych
Wybiórczo namnażające - są to podłoża z dodatkiem takich substancji, które umożliwiają wzrost tylko pewnych określonych gatunków bakterii czy grzybów a jednocześnie hamują wzrost innych gatunków
Różnicujące- zawiera substrat indentyfikacyjny, używane do badania metabolizmu bakterii
Transportowe
Diagnostyczno-transportowe
Komórka bakteryjna wchłania całą powierzchnią składniki pokarmowe wraz z otaczającego środowiska.
Oligotrofy- pobierają pokarm wodny wbrew gradientowi stężeń.
Zapotrzebowanie odżywcze komórki bakteryjnej odpowiada jej składowi chemicznemu:
- woda 80-90%
- węgiel 50% suchej masy
- azot 14%
-wodór 8%
-fosfor 3%
-siarka, potas, sód 1%
- wapń magnez, chlor 0,5%
Składniki pokarmowe są przez komórki wykorzystywane jako materiał budulcowy w czasie wzrostu i rozmnażania się jako źródło energii.
Prototrofy=drobnoustroje niewybredne zadawalają się prostymi organicznymi składnikami
Auksotrofy-drobnoustroje wybredne dodatkowo wymagają witamin aminokwasów lub substancji wzrostowych
Chemolitotrofy-jako źródła węgla wykorzystują związki organiczne
Zasady diagnostyki mikrobiologicznej :
Właściwe pobranie materiału i dokładne wypełnienie skierowania do laboratorium
Wstępna ocena- barwione preparaty mikroskopowe
Hodowla
Identyfikacja- cechy fenotypowe; określenie cech biochemicznych; określenie swoistych antygenów
Określenie wrażliwości bakterii na leki ( antybiogram)- metody podane poniżej
Diagnostyka serologiczna- stosuje się przy zakażeniu bakteriami których hodowla jest niemożliwa
Metody molekularne- analiza stuk tiry i właściwości kw. Nukleinowych
Wzrost na podłożu płynnym
Powierzchniowy- kożuszek lub błonka; bakterie tlenowe
Osad na dnie probówki- bakterie beztlenowe
Jednolite zmętnieni- bakterie względnie beztlenowe
Hodowla- to bakterie rosnące na podłozu stałym lub płynnym:
Hodowla mieszana- w skład jej wchodzą drobnoustroje różnych gatunków
Hodowla czysta- wywodzi się z jednej komórki bakteryjnej lub formy przetrwalnikowej
Metody otrzymywania hodowli:
Bezpośrednie- mikromanipulator
Pośrednie
Czystość hodowli można potwierdzić np. wykonanie preparatu barwionego z wyizolowanej kolonii
Sposób hodowli grzybów
Podłoża płynne i stałe: Saburaduca, Czapka, agar z brzeczką
Mikrohodowle- zakłada się je na szkiełkach podstawowych powleczonych cięką warstwą agaru, oceniane są w mikroskopie z ciemnym polem widzenia, umożliwiają różnicowanie faz rozwoju grzyba
Czas trwania hodowli 2-3 dni drożdżaki i pleśniaki; grzyby dimorficzne, dermatofity 3 tygodnie lub dłużej
Metody namnażania wirusów
Wirusy namnażają się na żywych komórkach:
Zwierzęta laboratoryjne
Zarodki kurze
Hodowle tkankowe: hodowle pierwotne; linie komórkowe diploidalne; ustalone linie komórkowe
Płyny odżywcze stosowane w hodowlach
Metody oznaczania liczby drobnoustrojów :
Bezpośrednie : bezpośrednie liczenie bakterii w preparacie mikroskopowym, oznaczanie liczby komórek w hemocytometrze Thoma lub Burketa; metoda filtrów membranowych
Pośrednie: metoda posiewu powierzchniowego, metoda posiewu głębinowego (płytek lanych); metoda nefelometryczna (skala McFarlana); metoda spektrofotometryczna
Co jest niezbędne do wzrostu bakterii na pożywce:
Odpowiednia wartość pożywki: pierwiastki biogenne (C,O,H,P,N,S) i mikroelementy, składniki organiczne i nieorganiczne
pH acidofile opt <5,0 neutrofile 5,0<opt<9,0, alkalofilne opt > 8.0
ciśnienie osmotyczne izotoniczne
wilgotność
temperature
pożywka musi być przejrzysta i jałowa
środowisko gazowe
Fazy wzrostu bakterii:
faza przygotowawcza
faza logarytmicznego wzrostu
faza równowagi
faza zamierania
Krzywa wzrostu bakterii- wykres przedstawiający liczbe komórek bakteryjnych w hodowli w zależności od czasu jej rozwoju
Hodowle stacjonarne
Hodowle ciągłe- bakterie utrzymywane są w fazie logarytmicznego wzrostu
Wzrost na podłożu stałym
Kolonia bakteryjna- widoczne makroskopowo na powierzchni lub w głębi pożywki stałej skupienia bakterii wyrosłe z jednej komórki lub jednej jednostki wzrostowej:
wielkość
kształt
brzeg
przekrój
powierzchnia
przejrzystość
barwa
stosunek do podłoża i zmiany podłoża wokół bakterii
konsystencja
zawieszalnośc
Antyseptyka sposób postępowania mający na celu niszczenie drobnoustroje w Ranach, Na błonie śluzowej I na skórze za pomocą antyseptyków w odpowiednich stężeniach.
ANTYSEPTYKI to związki Chemiczne o charakterze trucizn. Zabijace Lub hamujące Wzrost drobnoustrojów np. kwas borny. Woda utleniona, nadmanganian potasu, chloramina.
ASEPTYKA - sposób postępowania mający na celu niedopuszczenie do zakażenia miejsc, Płynów lub jałowych przedmiotów.
DEZYNFEKCJA= ODKAŻANIE zespół czynności maj4cy na celu zniszczenie Wegetatywnych form drobnoustrojów chorobotwórczych. Znajdujących się poza organizmem żywiciela.
SANITYZACJA czynność polegająca na zmniejszeniu Liczby drobnoustrojów Określonym środowisku do tzw. bezpiecznego poziomu np. wietrzenie, mycie, odkurzanie.
STERYLIZACJA= WYJALAWIANIE Zespół czynności fizycznych. Fizykochemicznych lub mechanicznych prowadzących do całkowitego zniszczenia lub usunięcia wegetatywnych i przetrwalnikowych form drobnoustroje znajdujących się w określonym, materiale płynie lub miejscu.
Proces zabicia w 100% nazywamy sterylizacją!
Pasteryzacja jednorazowe podgrzanie płynów do temp 62 °C przez 30 minut a następnie szybkie schłodzenie. W warunkach przemysłowych stosuję się tzw. szybką pasteryzacje podgrzewa się do temp 72 ° C przez 15 s. Proces ten niszczy tylko formy wegetatywne bakterii.
Tyndalizacja- jest to pasteryzacja dokonywana przez 3 kolejne dni, jeden raz dzienne. Ma na celu zniszczenie zarówno form przetrwalnikowych jak i wegetatywnych.
Wyjaławianie:
Metody fizyczne:
Opalanie- np. wyjaławianie ez
Wyjaławianie w suchym powietrzu - przeprowadza się w sterylizatorach w temp. Od 160 do 200 °C, tą metodą wyjaławia się różne metale i szkło ( ale bez gum)
Wyjaławianie parą wodną pod zwiększonym ciśnieniem- przeprowadza się w autoklawach w temp 121 °C przez 15 minut lub w temp 132 °C przez 5 minut, metodą tą można wyjałowić wszystkie materiały medyczne wytrzymujące temp. 140 °C
-wyjaławianie w bieżącej parze wodnej aparat Kocha, metoda ta służy do wyjaławiania pożywek materiałów gumowych szkła laboratoryjnego w temperaturze 100 stopni, czas wyjaławiania wynosi 15-30 minut, giną tylko formy wegetatywne
-wyjaławianie promieniami UV- promienie UV mają działanie bakteriobójcze (uszkadzające kwasy nukleinowe w komórce drobnoustroju), najsilniej działają promienie o długości fali około 2500A; odkażanie powietrza i powierzchni sprzętów w laboratoriach, salach operacyjnych.
Na skuteczność wyjaławiania promieniami UV ma wpływ: stopień zanieczyszczenia powietrza cząstkami mechanicznymi, długość fali promieni emitowanych przez lampę, czas napromieniowania, wilgotność powietrza, cechu indywidualne drobnoustroju.
- wyjaławianie promieniami gamma i X- głęboko przenikają przez przedmioty i płyny niszczą DNA i RNA w komórkach bakteryjnych i wironach, wykorzystywane są głównie w przemyśle spożywczym do konserwacji konserw
- wyjaławianie ultradźwiękami- dochodzi do mechanicznego uszkodzenia komórki bakteryjnej poprzez jej rozerwanie od wewnątrz.
2. Metody mechaniczne= filtracja- tę metodę stosuje się dla substancji, których nie można wyjałowić w inny sposób np.: witaminy, hormony, surowice odpornościowe, leki. Używa się filtrów posiadających pory różnych rozmiarów, zawsze jednak mniejsze od rozmiarów bakterii. Stosuje się filtry z ziemi okrzemkowej, azbestowe szklane i membranowe (obecnie stosowane najczęściej z estrów celulozy i nitrocelulozy).
ODKAŻANIE
Do środków chemiczny o działaniu odkażającym zaliczmy:
Woda- zmienia ciśnienie osmotyczne, powoduje pęcznienie i rozpad komórek bakteryjnych; woda również mechanicznie usuwamy drobnoustroje (zmywanie).
Kwasy i zasady zmieniają pH środowiska
Sole matali ciężkich- mają powinowactwo do białek powodując ich denaturyzajcę; działanie do silnie działających bakteriobójczo należą sole rtęci i srebra
Środki utleniające działają poprzez wydzielanie w środowisku wodnym wolnego tlenu atomowego, który utlenia i denaturuje protoplazmę lub poprzez denaturację białek
Barwniki stosuję się najczęściej błękit metylowy i zieleń malachinową; można odkażać śluzówki rany uszkodzoną skórę lub dodawać do pożywek wybiórczych jako czynniki hamujące wzrost bakterii, działają głównie na G+ a mniejszym stopniu na G-
Pochodne furanu- zakłócają cykl przemian oksydoredukcyjnych w komórce bakteryjnej: służą do odkażania śluzówek i ran
Alkohole- denaturacja białek
Fenole i krezole- niszczą formy wegetatywne bakterii i grzybów ich działanie polega na łączeniu się z elementami ściany komórkowej i z białkami komórki
Formaldehyd- głownie stosowany w laboratoriach i prosektoriach
Mydła- zmniejszają napięcia powierzchniowe
Detergenty- łączą się z lipidami ściany komórkowej bakterii tworząc ścisłą warstwe wokół komórki, powoduje to zahamowanie przenikania składników odżywczych
Gazy- stosuje się w celu zniszczenia drobnoustrojów w powietrzu i na powierzchni przedmiotów
Czynniki wpływające na skuteczność dezynfekcji
Użyty środek
Drobnoustrój - rodzaj
Środowisko- pH stopień zanieczyszczenia itp.
ANTYBIOTYK- to substancja przeciwbakteryjna pochodząca od organizmu żywego, pochodna chemiczna takiej substancji lub jej analog otrzymany syntetycznie. Substancje nie mające naturalnego analogu to chemioterapeutyki. W szerokim pojęciu antybiotykiem jest każdy lek przeciwbakteryjny.
Antybiotyk bakteriostatyczny- to lek pozbawiający bakterie zdolności do podziału, wtedy kiedy jego stężenie przekracza określoną wartość graniczną. Po obniżeniu stężenia bakterie odzyskują zdolnośc podziału.
Antybiotyk bakteriobójczy- to antybiotyk, który w określonym stężeniu i czasie zabija bakterie, czyli trwale pozbawia je zdolności do podziału ( mogą one zachować aktywność metaboliczną).
Antybiotyk wąsko widmowy- wykazuje aktywność tylko wobec bakterii G+, niekiedy dotyczy także bakterii G-
Antybiotyk szeroko widmowy- są aktywne wobec G+ jak i G-
Aktywność przeciwbakteryjną antybiotyku określamy oznaczając ich najmniejsze stężenie hamujące MIC w przypadku A. bakteriostatycznych, a w przypadku bakteriobójczych najmniejsze stężenie bakteriobójcze MBC.
Określenie wrażliwości na antybiotyki (antybiogram):
Metody jakościowe -określają stopień wrażliwości badanego drobnoustroju na antybiotyk: - metoda dyfuzyjno prążkowa- na podłoże stałe z posianym szczepem nakłada się krązki bibułowe nasączone badanym antybiotykiem; - metoda przeglądowa- na podłoża stałe lub płynne z określonymi stężeniami leków posiewa się badany szczep
Metody ilościowe:
- metoda rozcieńczeń na podłożu stałym
- metoda E-testów
Oznaczanie wrażliwości prądków kwasoodpornych:
Metoda wskaźnikowa- ocena lekowrażliwości badanego szczepu w stosunku do szczepu wzorcowego
Metoda absolutnych substancji -ocena wzrostu szczepu przy zastosowaniu stężenia substancji uznanych za zabójcze
Metoda proporcji-ustalenie liczby osobników odpornych i wrażliwych na dany lek w populacji badanego szczepu
Wskazania do stosowania antybiotyku:
Drobnoustrój został rozpoznany bakteriologicznie i wykazuje wrażliwość na dany antybiotyk
Brak rozpoznania bakteriologicznego ale pacjent jest w ciężkim stanie klinicznym
Brak rozpoznania bakteriologicznego ale rozpoznanie kliniczne pozwala sądzić że drobnoustrój jest wrażliwy na dany antybiotyk
Podanie zapobiegawczo przed zabiegiem operacyjnym
Przeciwwskazanie do podania antybiotyku:
Brak rozpoznania bakteriologicznego i brak stanu zagrożenia życia
Zakażenie jest spowodowane drobnoustrojem wrażliwym na dany antybiotyk
Współistniejące choroby
Uczulenie na składnik antybiotyku
Ogólne zasady leczenia antybiotykami:
Prawidłowe rozpoznanie kliniczne
Rozpoznanie bakteriologiczne
Odpowiedni wybór leku
Ustalenie odpowiedniej dawki do podania i jej drogi
Objawy uboczne antybiotykoterapii:
Miejscowe podrażneinie żył
Nudności, wymioty biegunki
Odczyn alergiczny i anafilaktyczny
Zespół Hoigne- objawy od OUN w mechanizmie zatorowym
Zespół Nikolau- zatory w kończynie dolnej
Anemia, neutropenia, trombocytopenia
Bezpośrednie działanie cytotoksyczne
Zmiany patologiczne błon śluzowych w związku ze zniszczeniem flory fizjologicznej
Nadważenia szczepami odpornymi
Niedobór Wit B i K
Terapia celowana: wybór leku jest oparty na wynikach antybiogramu
Terapia empiryczna: wybór leku jest oparty na doświadczeniach empirycznych klinicysty
Wielkość bakterii w µm 0,5 do 5,
wielkość bakterii chorobotwórczych dla człowieka : 1-3 µm
Kształty komórek bakteryjnych:
Kulisty- tzw. ziarniaki
Cylindryczny- laseczki, pałeczki, maczugowce, wrzecionowate
Spiralny- krętki, przecinkowce, śrubowce .
Pleomorfizm- wielkość i kształt komórek bakteryjnych mogą ulec zmianie w zależności od warunków środowiska
Budowa komórki bakteryjnej:
Elementy stałe:
Ściana komórkowa
Błona cytoplazmatyczna
Cytoplazma
Nukleoid
Elementy zmienne:
Rzęski
Fimbrie
Otoczki
Przetrwalniki
Wtręty ciałek zapasowych
Ściana komórkowa:
Gruba sztywna, poł. na zew bł. Cytoplazmatycznej
Główny składnik ściany komórkowej to peptydoglikan-mureina
Ma znaczenia w procesach podziału komórkowego
Pa receptory dla bakteriofagów i bakteriocyn
Cytoplazma:
Nukleoid- chromosom bakteryjny
Plazmidy- pozachromosomowe składniki genetyczne
Rybosomy- ośrodki zyntezy białek
Ziarnistości zapasowe
Tylkaloidy/chromatofory
Otoczka- najbardziej zewnętrzna warstwa w komurce bakteryjnej, jest zbudowana z wielocukru otacającego sciśle otaczającego komórke. Chroni bakterie prze wysychaniem, fagocytozą, uczestniczy w adchezji.
Glikokaliks- wielocukier tworzący luźną warstwe włukienek w komórce, uczestniczy w reakcji przylegania.
Przetrwalnik-Endospora- jest to komórka spoczynkowa odporna na czynniki chemiczne wysuszenie, temperaturę,.
Rzęski, wici- organelum ruchu, występuje u wszystkich bakterii spiralnychi u około połwy znanych pałeczek i laseczek, nie barwią się rutynowo.
Fimbrie- są to sztywne wypustki białkowe występujące na powierzchni komórki bakteryjnej niezależnie od rzęse. Są od nich krótsze i delikatniejsze. Są widoczne tylko w mikroskopie elektronowym. Fimbrie zwykłe i fimbrie płeciowe.
Mutacja- spontaniczna zmiana w DNA powodująca zazwyczaj pojawienie się nowej cechy.
Wymiana genów między bakteriami- baktreie mogą wymieniać się genami dzięki czemu uzyskują nowe cechy ( lekowrażliwość, lekoodpornośc)
Transformacja- bakterie pobierają wolne DNA ze środowiska
Transdukcja- DNA jest przenaoszone przez bakteriofagi
Koniugacja- bezpośrednie przenieśienie DNZ z jednej komórki bakeryjnej do drugiej podczas kontaktu tych komórek za pomocą fimbrii płeciowych
Barwienie bakterii- umożliwia odróżnienie od innych składników preparatu.
Barwniki:
- zasadowe barwią komórke
- kwaśne barwią tło
Barwienie pozytywne- barwienie komórki + niebarwne tło
Barwienie negatywne- barwne tło + komórki bezbarwne
Barwienie pozytywno-negatywne- barwienie komórki + tła
Barwienie proste- stosuję się tylko jeden barwnik.
Barwienie złożone-stosuje się dwa lub więcej barwników:
Barwienie metodą Gramma
Metoda Zihnela-Neelsena
Metoda Neissera
Egzotoksyny- są to substancje białkowe wytwarzane prze bakterie G+ i niektóre G-; wydzielene są przez komórke do środowiska:
Enterotoksyny
Neurotoksyny
Cytotoksyny
Endotoksyny- są to toksyny zawarte w komóce bakteryjnej i uwalnianie w momencie jej rozpadu.
Efekty biologiczne endotoksyn:
Wstrząs
Reakcje skórne
Aktywacja dopełniacza
Leukocytoza
Agregacja płytek
Indukcja syntezy interferonu
Właściwości biochemiczne bakterii:
Właściwosći sacharolityczne
Własciwości związane z metabolizmem azotowym
Właściwości lipolityczne
Mikroskopy używane w mikrobiologii:
Mikroskop świetlny
Mikroskop z ciemnym polem widzenia
Mikroskop fazowo-kontrastowy
Mikroskop fluorescencyjny
Mikroskop ultrafioletowy
Mikroskop elektronowy
Zasady kwalfikacji bakterii:
Szczepgatunekrodzajrodzinarządklasa
Zasady identyfikacji bakterii:
Preparat mikroskopowy
Hodowla
Cechy biochemiczne (metabolizm)
Diagnostyka serologiczna
Badanie podobieństw materiału genetycznego.
Wymień i opisz elementy niestałe budowy bakterii
To samo ale stałe
Porównaj procariota i eucariota
Czynniki wrażliwości barterii(stałe i zmienne)
Formy rozmnażania
Porównanie fermentacja,tlenowe,beztlenowe
Proces wzrostu bakterii na podłożu stałym,płynnym +przykłady
Metody hodowli bakterii beztlenowych
To samo ale tlenowe
Jakie warunki trzeba spełnić aby hodować bakterie bardzo wymagające
Metody otrzymywania czystych kultur bakterii
Metody oznaczeń liczby bakterii
Teoria barwienia,jakie metody(pozytywne,negatywne)
Dlaczego Gram + barwią się na fioletowo a Gram - na czerwono
Od czego zależy skuteczna dezynfekcja i jak ją badamy
Wymień czynniki fizyczne dezynfekcji
Środki do dezynfekcji oraz wymienić grupy na jakie działają (wymienic bakterie oraz jak na nie działają)
Rodzaje metabolizmu komórek i diagnostyka
Podział antybiotyków +przykłady+na co działają
Oznaczanie wrażliwości drobnoustrojów na chemioterapeutyki i antybiotyki
Leczenie skojarzone,działanie antagonistyczne i synergistyczne antybiotyków
Działanie antybiotyków na bakterie +przykłady
Genotypowe i fenotypowe mechanizmy uodparniania
Charakterystyczne elementy budowy bakterii i ich znaczenie w diagnostyce
Szkodliwość działania antybiotyków na człowieka
Enzymy bakteryjne jaką rolę pełnią w życiu
Chemiczne środki dezynfekcyjne
Rodzaje podłóż
Kształt i wielkość bakterii
Postulaty Kocha patrz niżej
Postulaty Kocha: Postulaty Kocha
Podczas studiów medycznych na Uniwersytecie w Getyndze Robert Koch zetknął się z Gustavem Henle, wybitnym anatomem i patofizjologiem, który uważał, że przyczyną chorób są czynniki zakaźne. Był to wówczas zupełnie niepopularny pogląd.
Dzięki pracom nad bakteriami Bacillus anthracis, a póżniej Mycobacterium tuberculosis, Koch miał możność sprawdzić prawdziwość tej tezy. W 1884 roku opublikował pracę, w której zawarł precyzyjne kryteria, które należy spełnić by udowodnić, że dany mikroorganizm ("zarazek") jest przyczyną choroby. Kryteria te nazwano postulatami Kocha.
Zarazek musi być obecny w organizmie wszystkich osobników chorych na daną chorobę
Zarazek nie może występować u osobników zdrowych
Zarazek musi być wyizolowany od chorego osobnika w postaci czystej kultury i namnożony poza organizmem gospodarza
Wprowadzenie inoculum czystej kultury zarazka do organizmu zdrowego osobnika z tego samego gatunku musi wywołać chorobę o tych samych objawach
Zarazek ponownie wyizolowany w postaci czystej kultury z eksperymentalnie zarażonego osobnika musi być identyczny z pierwotnie wyizolowaną kulturą
Dziś te postulaty te wydają się nam właściwie bardzo logiczne i jasne, rzecz jest jednak bardziej skomplikowana. Ograniczenia postulatów Kocha
Obecność w organizmie naturalnej flory fizjologicznej;
niektóre bakterie są tzw. patogenami opportunistycznymi wywołują chorobę, kiedy:
nabędą cechy wirulentne
przedostaną się przez naturalną barierę skóry lub błony śluzowej, gdzie naturalnie bytują, wgłąb tkanek np. po skaleczeniu lub wskutek operacji chirurgicznej
mają sprzyjające warunki do rozwoju np. następuje osłabienie organizmy wskutek infekcji wywołanej inną bakterią
Nie wszystkie osobniki danego gatunku są tak samo podatne na zakażenie określonymi bakteriami, typowym przykładen są chorzy na AIDS o obniżonym stanie odporności
Nie wszystkie "zarazki" możemy wyhodować in vitro, w czystej pożywce. Nie udało się to w przypadku Mycobacterium leprae i Treponema pallidum. (Pomijajam oczywistą sprawę wirusów)
Ponieważ ze względów etycznych nie jest możliwe przeprowadzenie doświadczeń na ludziach, eksperymenty prowadzi się na zwierzętach. Nie zawsze jednak można znaleźć odpowiedni model zwierzęcy.
Strona | 16
Lewy. & C.o. ® All rights reserved, thx dla Longera
10 listopada 2007