5

Warunki rozdziału chromatograficznego:

-    prędkość przepływu fazy ruchomej przez kolumnę: 1,5 cm³ min'¹

-    elucja izokratyczna

-    czas analizy: 12 minut

-    objętość nastrzyku: 10 pl (krzywa wzorcowa w zakresie 0,01 - 0,2 ng pi'¹ dla objętości nastrzyku 10 pl)

Warunki detekcji:

-    długość fali wzbudzenia / absorpcji 295 nm

-    długość fali emisji 405 nm

Ekstrakcja kwasu salicylowego z liści tytoniu szlachetnego:

1.    zamrożony liść umieścić w wychłodzonym moździerzu i rozcierać w ciekłym azocie do uzyskania proszku

2.    odważyć 0,3 g rozdrobnionej tkanki i zalać 5 ml 90 % metanolu

3.    dokładnie wymieszać i sonifikować przez 10 minut

4.    odwirować i odparować do uzyskania suchego ekstraktu

5.    pozostałość rozpuścić w 500 pl fazy ruchomej, przefiltrować i umieścić w fiolce autosamplera

Oznanczenia zawartości kwasu salicylowego:

1.    Zamontowanie kolumny wraz ze stalowym filtrem prekolumnowym (0,5 pm)

2.    Uruchomienie degazera próżniowego

3.    Przemycie układu i kolumny acetonitrylem, wodą i buforem octanowym

4.    Wprowadzenie parametrów analizy z komputera na aparat

5.    Monitorowanie ciśnienia w układzie i linii bazowej dla fazy ruchomej

6.    Nastrzyknięcie próbek

7.    Analiza zebranych danych, tj. porównanie chromatogramu z detektora fluorymetrycznego oraz absorpcyjnego przy długości fali wzbudzenia oraz w ujęciu 3D

8.    Identyfikacja kwasu salicylowego przez porównanie czasu retencji piku i wzorca

9.    Kwantyfikacja kwasu salicylowego metodą krzywej wzorcowej dla pola powierzchni pod pikiem

10.    Kondycjonowanie kolumny buforem, wodą i acetonitrylem

11.    Odłączenie kolumny chromatograficznej

5