img051 (2)

Kolbkę Rożkową zawierającą 20 mJ ścieków mleczarskich lub z zakładów mięsnych o pH początkowym 9.0 skorygowanym za pomocą 0.05 N NaOH umieścić w łaźni wodnej o temperaturze 37°C, okresowo mieszając. Do.kolbki dodać ląil odpowiednio rozcieńczonego enzymu proteohtycznego- proteinazy serynowęj Bacillus subtilis. Po 0, 15, 30, 60 i minutach od momentu rozpoczęcia hydroliz}^{1 2}, czyli od momentu dodania enzymu do płynu umieszczanego w kolbie, pobierać po 1 ml mieszaniny reakcyjnej celem wykonania oznaczenia z odczynnikiem Folina.

5.2. Wykonanie oznaczenia z odczynnikiem Folina

Proteina^a serynowa-subtylizyna uwalnia z kazeiny mleka lub z hemoglobiny krótkie peptydy, rozpuszczalne w , roztworze kwasu trój chlorooctowego, które oznacza się ilościowo w reakcji z odczynnikiem Folina.

W tym cęlu do 1 ml mieszaniny reakcyjnej pobranej w czasie tx należy - dodać 2 ml 5% roztworu CCL3COOH, służącego do odbiałczenia roztworu.

R>fd£k-0 1 C&OjCM-

Dokładnip wymieszać, i pozostawić na 30 minut w temperaturze pokojowej, po czym przesączyć przez sączki. z bibuły wolnosączącę. Pobrać $5- ml klarownego przesączu i dodać $^ml 0.6 N NaOH oraz ml odczynnika Folina (1:2). Dokładnie i szybko wymieszać. Po 10 minutach oznaczyć absorbancję ,JE” przy długości Mi 690 nm wobec próby, która zawiera i' ml wody zamiast badanej mieszaniny reakcyjnej.

5.3. Analiza wyników ^

i IMZO

Sporządzać wykres E = f (t) obrazujący dynamikę reakcji hydrolizy kazeiny zawartej, w ściekach mleczarskich i hemoglobiny zawartej w ściekach przemysłu mięsnego.

1

Pytania

*    -metody hydrolizy białek,

2

-własności i zastosowanie proteinazy seiynowej, -metoda wyznaczania dynamiki hydrolizy białek.