TestÚS ELISA

2

Walni

U .1II ISA (skiot angielskiej nazwy: linzy.nc Lmkcd ImmunoSorbent Assay - tent i n/yuialyczno • nmnunosoiljcyjny) jest bardzo czulÄ… metodÄ… która umożliwia \v\kiyiu antygenu zwiÄ…zanego przezspccyliczne przeciwciaÅ‚a, dziÄ™ki reakcji barwnej katalizowanej pi zez enzym

I vM ten może być stosowany do wykrywania i identyfikacji wirusów a (akzc ntgiinumuw i.ukophumopodohnych i bakterii, dla któiych udaÅ‚o siÄ™ otrzymać i* agujiit u i umil pucu weinle

/aamla leniu w podstawowej wersji, t/.w DAS-KI.ISA (Double Anlibody Sand wieli

I I ISA podwójna kanapka pizeciwciulowa) jest stosunkowo prosta (Kys.

PutyiÄ™ut linii Nludzifitek ulorniowanycb w pÅ‚ytce polistyrenowej jest oplaszczi na pi . « uwi niliinn (etap I) NastÄ™pnie w studzienkach mkubowany jest ckshnkt t^,,/YUidow«my ✓. badanej roÅ›liny (etap 2j CzÄ…steczki wnusa, o ile wystÄ™pujÄ… w ul> di nki ui, »ą im tym etapie wychwytywane przez przeciwciaÅ‚a zaadsorbowanc na powlnuÄ™luu pÅ‚ytio Po wypÅ‚ukaniu studzienek, nanos siÄ™ do nich koniugnl, czyli pi/n iwi i.ila zwiÄ…zano chemit/mu z enzymem i inkubujc (map 3). Po kolejnym pÅ‚ukaniu enzym pozostaje tylko w tych studzienkach, gdzie obecność wirusa w td. iii.d.cie badanej roÅ›liny uino/hwila utworzenie kompleksu (kanapki): przeciwciaÅ‚o -wnoÅ› konmgat Obecność enzymu est wykrywana na podstawie intensywnoÅ›ci ictikiiji bai wej katalizowanej przez ten enzym (etap l) W elekcie na podstawa arwy i o/twoi u w •Uidzionce można wnioskować o obecnoÅ›ci luj braku wirusa w b; danej * piolu o

Nan zy*Ooj wykorzystywanym do (ostów IśLISA w wirusologii roślinnej enzymen.

H' ,i iilkaln zim foslklnza (Alkolinc phosphatase - ALP. EC 3.1.3.1) dla której mibiitJiiinfii j«-ni p-iutrolcnyloiósÅ‚brnn W wyniku reakcji katalizowanej przez enzyn. ImvImi wny uiluarnt ulega przemianie w zółly (absorbujÄ…cy Å›wiatÅ‚o o dÅ‚ugoÅ›ci ah do^imo p-mtiotcnol

1 tp.óc/ opisunęgo powyżej testu DAS-ElSS!?

"*....... ^mr""^{h w}    ,c: * P»»kiycc inne

wyk».,y,ly_wil,„ w.......    do    ^S-HUSA

i Iiuobi-uic wyk.ywn,,,,, «„k_ol„_y(Jl ,|_U5U    z Winisem

pi/iv mu iciikcji baiwuycli    enzymów dz.yki kÄ…lfl^wainu

W p.aklyi r mijc/yściej spolyka się inodylikację

.1 alf aktu ( ./> d anego / badanych próbek), komunJ"•J^rtOc^j _IMfc_ubacjl

(«"« • "•¹¹ d l I ISA) ( zÄ™sto stosowane sÄ… uu różne we '• ^kul<,;»l-ICl.KS/\

fiiklłbiu pi k omupaiii jrii tu zmltwkmM inkubacją_/(/w ^^^Wa,u,n<u Pośrec niego

(W o.ho/f .Uiiif Od wychwytujÄ…cych uiylycÅ‚i do opla^J*^**¹'" ^{1 r2cw}**wlnm

JU/CCIWCII am. irnnujc ,pccjnlny ki-mugal wykrywajÄ…cy id, oh    ^{0 0}°^Å‚>,Cl0 * *yn*i

Ohm ność wlfusa    oocenuść i poÅ›rednio

Pl/ykli.diuic pioccdury r..| przedstawione w dah/_c, _Cz«.*ri -a. . . .

(MS I USA    M. I"    ^    -

ki.kl.nl IMS M ISA Jlr 17 K„l,')■• I I ISA »" I*

WiÄ™a-i inl'wm»«li larbwo ««ól..ycli Jak iprt&(wcb «₈k«„_wcJ( •

, , ISA I r«» —........." Z '    ^.....

„.InoSnik. pudmo UH"* ¹¹