07

Rys. 10.14. Typowe obrazy chromatograficzne rozdziału nuklcozydów zawartych w hydrolizatach DNA, przygotowanych wg procedury opisanej w ćwiczeniu. 20 pi hydrolizatu chromatografowano na kolumnie Ultra-sphcrc C_1H. stosując clucję izokratyczną za pomocą 50 mM roztworu KH₂P0₄ zawierającego 5% (v/v) metanolu, z szybkością przepływu eluentu 1 ml,-min. i używając detekcji UV przy długości lali 279 nm. Preparaty DNA przygotowywane w sposób opisany w ćwiczeniu zawierają czasem dużą ilość RNA. W związku z tym na chroraatogramach obserwuje się również piki pochodzące od rybonukleozydów wchodzących w skład RNA. a)Chronuitogram prezentuje rozdział nuklcozydów hydrolizatu DNA zawierającego bardzo małą ilość RNA. Główne szczyty chromatogramu w tym przypadku pochodzą od dcoksynuklcozydów: 2'-dcoksycytydyny (dC), 2-deoksyguanozyny (dG), 2'-deoksytymidyny (dT) i 2-dcoksyadenozyny (dA). Kiedy preparat wyizolowanego DNA zawiera duże ilości RNA, typowy chromatogram przybiera kształt b). Poza już wymienionymi deoksy-nukleozydami pochodzącymi z DNA obserwuje się w tym przypadku również cztery duże szczyty rybonuk-Icozydów wchodzących w skład RNA: cytydyny (C), urydyny (U), guanozyny (G) i adenozyny (A); ponieważ wszystkie te szczyty są rozdzielone, szczyty rybonukleozydów nic przeszkadzają w oznaczeniu dC i 5-Mc-dC

427