0 5

Rys. 10.16. Schemat analizy opartej na technice biotu i hybrydyzacji metodą Southerna

przyczyną są często zmiany mutacyjne w DNA, powodujące zanikanie bądź pojawianie się miejsc restrykcyjnych, rozpoznawanych przez stosowane nukleazy. Analiza RFLP jest wykorzystywana np. w badaniach dziedzicznych uwarunkowań różnych chorób (kiedy analizuje się korelację naturalnych polimorficznych cech struktury DNA z częstością zachorowań na określoną chorobę), ale bywa też użyteczna w wykrywaniu mutacji somatycznych w badanych genach.

W przypadku analizy funkcjonalnej aktywności określonych genów intensywność ich transkrypcji bada się poprzez pomiar ilości powstającego mRNA. Wyizolowany z komórek całkowity RNA (niekiedy wyodrębnia się pulę mRNA) rozdziela się na drodze elektroforezy w żelu agarozowym i, podobnie jak w przypadku Southern blotting, rozfrakcjonowane cząsteczki RNA przenosi się na błony nylonowe lub nitrocelulozowe. Badacze nazwali żartobliwie ten proces Northern blotting. Hybrydyzacja ze specyficzną sondą molekularną ujawnia sygnał, którego natężenie, po odniesieniu do prób wzorcowych, jest miarą aktywności badanego genu.

Ostatnio tymi technikami hybrydyzacyjnymi analizuje się nie tylko wyjściowy, genomowy DNA (lub RNA), ale namnożone fragmenty genów', wyodrębnione i uzyskane w precyzyjnie zaplanowany sposób za pomocą łańcuchowej reakcji polimerazy — PCR (podrozdz. 10.3.5).

455