1672o2q

4. Konwencjonalna analiza przebiegu mcjozy w spermatocytach (wg Evans i in.,1964)

Procedura:

3.1. Pozyskiwanie materiału:

-    pobranie materiału do badań: wycinki jąder samczych

-    umieszczenie materiału biologicznego na szkiełkach zegarkowych i maceracja tkanki /uwolnienie spermatocytów z wnętrza kanalików plemnikotwórczych/

-    przeniesienie homogenizatu do 50ml roztworu hipotonicznego (roztwór 1% ^CeHjO, x 2 H₂0)

-    poddanie homogenizatu intensywnemu wytrząsaniu przez 2 godz /wypłukiwanie pojedynczych komórek z kanalików nasieniotwórczych/

-    pobieranie co 15 min próbek do probówek wirowniczych (około 0,5-1 ml zawiesiny/próbę)

3>X - h

/Czynność powtarzana 8x = 2godz/

3.2. Utrwalanie materiału:

-    odwirowanie zawiesiny komórek przez'# min przy 1500 rpm (obrotów/minutę)

-    usunięcie supernatantu z nad osadu

-    dodanie 5ml utrwalacza Carnoy’a (mieszanina metanolu i lodowatego kwasu octowego w stosunku 3:1)

/Czynność powtarzana 5 -6x/

3.3. Przygotowanie i barwienie preparatów z chromosomami mejotycznymi:

-    na odtłuszczone szkiełka przedmiotowe nakrapia się 3-5 kropli zawiesiny

-    suszenie w temperaturze pokojowej

-    barwienie 10% wodnym roztworem barwnika Giemsy przez 30 min

-    płukanie w wodzie destylowanej /Przechowywyanie preparatów w temperaturze pokojowej/