OZNACZANIE ANTYGENU D UKŁADU Rh
Obecność antygenu D określa się na podstawie występowania lub braku aglutynacji krwinek badanych z odczynnikami monoklonalnymi anty-D. W badaniu stosowane sa. 2 odczynniki monoklonaine: anty-DaLEND (przeciwciała klasy IgM+IgG) oraz anty-lWn (przeciwciała klasy JgM).
ZESTAW ĆWICZENIOWY
Odczynniki monoklonaine anty-DatEł® i anty-DsuMi, roztwór PBS ( zbuforowany roztwór 0,9% NaCI o pH=6,9), 10% zawiesina krwinek wzorcowych 0 Rh(+)i 0Rh{-) w PBS, probówki wirownicze, statyw do probówek, wirówka, szkiełka podstawowe, bagietki plastikowe, pipety, igły, strzykawki, staza, wata, płyn odkażający, pisaki.
Pobrać 5 ml krwi z żyły łokciowej, przelać do probówki i odczekać, aż skrzepnie. Skrzep oddzielić delikatnie bagietką od ścianek probówki i odwirować w wirówce przez 3 minuty z prędkością. 1500 obrimin. Z odwirowanej próbki za pomocą pipety odciągnąć surowicę i przenieść do oddzielnej probówki. Następnie przenieść 5 kropli krwinek do probówki wypełnionej w 2/3 roztworem PBS. Wirować próbkę przez 3 minuty z prędkością 1500 obr./min. Zlać nasącz. Czynności przemywania krwinek roztworem PBS powtórzyć dwukrotnie. Sporządzić 10% zawiesinę krwinek badanych w roztworze PBS. Wszystkie probówki dokładnie opisać.
KONTROLA SWOISTOŚCI I AKTYWNOŚCI ZESTAWU WZORCOWEGO
Na 1 szkiełku podstawowym umieścić obok siebie 2 krople 10% zawiesiny krwinek wzorcowych 0Rh(+). Do pierwszej kropli dodać odczynnika anty-DBtzNt>. a do dnjgiej 1 kroplę anty-D rum!.
Na 2 szkiełku umieścić obok siebie 2 krople 10% zawiesiny krwinek wzorcowych ORn(-). Do pierwszej kropli dodać 1 krople odczynnika anty-DeLŁsn, a do drugiej 1 kroplę anty-D*uMi. Poszczególne krople wymieszać delikatnie bagietką.
Po 5 minutach ocenić aktywność zestawu wzorcowego. Siła aglutynacji nie może być mniejsza niż +++. Po 10 minutach od nakropicnia sprawdzić wszystkie krople, w których oczekujemy reakcji ujemnych- krople mąjąpozostać w postaci jednorodnej zawiesiny.
W przypadku odczynnika anty-DBięNÓ należy przestrzegać zalecanego czasu reakcji, ponieważ jego wydłużenie może spowodować, że przeciwciała IgG zablokują dostęp przeciwciał IgM do determinant na krwinkach i wynik będzie fałszywie ujemny.
odczynniki monoklonaine/ krwinki wzorcowe |
anty-DsL£M> |
anty-D*uMi |
Rh(+) |
+++ |
-H-+ |
Rh(-) |
- |