img103 3

Tabela 4.11. /.MlRMicnit najc/ę&cicj Klonowanych (wg katalogów Amersham Pharmacia Biotcch ora/		/lo/ >«'|| ilu lim Mml nn l«W i	kowalencyjnego wią/uniu ligami .)
		(•rupu
l.p.	Ugand	funkcyjna liguiidu użyta do wią/uniu /. nocnikiem	Na/.wa handlowa /loża
1	Białka, peptydy, aminokwasy, kwasy nukleinowe, polinukleotydy	aminowa	CNBr-activatcd Sepharose III Activated CM-Scpharosc 4H Epoxy-activated Sepharose Ml CH-Scpharose 4B Affi-Gel 10 AfTi-Prep 10
2	Białka, peptydy, aminokwasy	karboksylowa	AH-Scpharosc 4B Affi-Gel 102
3	Cukrowce	hydroksylowa	Epoxy-activatcd Sepharose Ml Affi-Gel Hz
4	Białka, peptydy, aminokwasy, nuklcotydy zawierające siarkę	tiolowa	Thiopropyl Sepharose 6B Activatcd Thiol Sepharose III Affi-Gel 501
5	Antybiotyki, hormony, koenzymy, inne małocząstcc/.kowc biomolckuły	grupy dystansowe: aminowa, tiolowa hydroksylowa, karboksylowa	CH-Sepharose 4B AH-Scpharose 4B Epoxy-activated Sepharose Ml Activatcd Thiol Sepharose III Thiopropyl Sepharose 6B Affi-Gel 601

W tabeli 4.12 zestawiono obecnie dostępne złoża przeznaczone do izolował różnych grup biopolimerów. Warto zauważyć, że chromatografii powinowaci można z powodzeniem użyć również w celu usunięcia niepotrzebnych substaiu / interesującego nas preparatu. Na przykład końcowym etapem izolowania lii rynogenu jest przepuszczenie izolatu przez złoża Gelatin Sepharose 4B i l.ysu Scpharose 4B. dzięki czemu otrzymuje się preparat fibrynogenu wolny od śladowy* ilości fibronektyny i plazminogcnu. W innych sytuacjach dobrze jest zastosown dodatkowe oczyszczanie preparatów tak, aby pozbyć się endotoksyn (AfTi-P polymyxin) lub proteaz serynowych (Benzamidine Sepharose 6B, Arginine Se| ha rosę 4B). Prawidłowo używane i przechowywane złoże można stosować wici krotnie w ciągu wielu miesięcy, bez zauważalnych zmian w zdolności takiego złoi do wiązania odpowiednich substancji.

Ćwiczenie 4.21. Aktywowanie żelu Sepharose w reakcji z bromocyjanem i wiązani liga udu białkowego (P. Cuatrecasas i wsp. 1968: Proc. Nat. Acad. Sci. USA. M 636 643)

Zasada: Dokładny mechanizm tej reakcji nie jest znany. Uważa się, że w reakcji bromocyjanu z grupami wodorotlenowymi reszt cukrowych agarozy tworzą i\ cykliczne i niecykliczne ugrupowania karboimidowe. Te grupy aktywne są nietrwało w środowisku wodnym, więc powstałych pochodnych należy natychmiast użyć do

hi lula 4.12. Zestawienie złóż najczęściej stosowanych w chroniutourHfll |>owlnowaclwu (wg katalogów Amersham Pharmacia Biotcch ora/. Bio-Rad na 1999 r.)

l.p.	Swoistość w stosunku do ligandu	Nit/w u handlowa /loża
I	Region Ft immunoglobulin G. umożliwia frakcjonowanie podklas IgG	Protein A Sepharose CL-4B Protein A Sepharose 4FF Protein A Sepharose 6MB Protein G Sepharose 4B Protein G Sepharose 4FF Protein G Sepharose CL-6B Affi-Gel protein A Affi-Prep protein A
2	a-D-mannoza. a-t>-glukoza i strukturalnie podobne cząsteczki	Lcntil Lcctin Sepharose 4B Con A Sepharose 4B Affi-Gel 600
3	iV-acctylo-D-glukozamina. a-2-makroglobulina, ccruloplazmina, polimer haptoglobina hemoglobina	Wheat Germ Lcctin Sepharose 6MB
4	Eukariotyczny mRNA Dehydrogenazy zależne od NADP Dehydrogenazy zależne od NAD Polimeraza DNA, polimeraza RNA, białka wiążące DNA. nukleotydy poli(A) i poli(U), białka wiążące RNA, interferon, mRNA i rybosomy	7-Mcthyl-GTP Sepharose 4B 2'5'-ADP Sepharose 4B 5'-AMP Sepharose 4B DNA-Agarosc (/denaturowany DNA) DNA-Cellulosc (natywny DNA) 01igo(dT)-Cellulose Poly(U)-Scpharosc 4B Po!y(A)-Scpharose 4B AGPoly-(I)- Poly(C) Typc 6 AGPoly(U) Typc 6
5	Rybosomowy RNA, podwójna nić DNA. plazminogcn, aktywator plazminogenu	Łysinę Sepharose 4B
6	Enzymy zależne od nukleotydów, albumina i inne białka	Blue Sepharose CL-6B Affi-Gel blue
7	Proteazy, albuminy	DEAE Affi-Gel blue CM Affi-Gel blue
8	Endoksyny	Affi-Prep polymyxin
9	Czynniki wzrostu, czynniki krzepnięcia, lipoprotciny, proteazy	Heparin Sepharose CL-6B Affi-Gel Heparin
10	Białko A i białko G oraz ich koniugaty	IgG Sepharose 6FF
II	Fibroncktyna	Gelatin Sepharose 4B
12	Białka oddziałujące z kalmoduliną, neurotransmitery, kinazy białkowe	Calmodulin Sepharose 4B
13	Białka zależne od glutationu, S-transferazy	Glutathionc Sepharose 4B
14	Proteazy serynowc	Bcnzamidinc Sepharose 6B Arginine Sepharose 4B

151