img182

• Wykonanie:

1.    Oznaczanie liczby bakterii z uwzględnieniem bakterii wytwarzających

barwniki:

-    pobrać próbki powietrza ww. metodami na podłoże agarowe odżywcze (MPA);

-    inkubację hodowli prowadzić w temp. 26 i 37°C w ciągu 48 h;

-    po okresie inkubacji policzyć wyrosłe kolonie, uwzględniając w ogólnej liczbie bakterie wytwarzające pigment.

2.    Oznaczanie liczby bakterii hemolizujących.

Zdolność bakterii do hemolizy, tj. rozpuszczania krwinek czerwonych

(erytrocytów), jest związana z wytwarzaniem przez nie toksyn i enzymów. Zdolność hemolizy krwinek mają:

-    ziarniaki Gram-dodatnie, tlenowe i względnie beztlenowe, głównie z rodzajów Staphylococcus i Streptococcus\

-    bakterie pałeczkowate Gram-ujemne, tlenowe z rodzajów: Pseudomo-nas, Acinetobacter, Bordetella i Haemophilus-, beztlenowe z rodzajów: Bacteroides, Fusobacterium, Leptotrichia i Butyrwibrio, oraz względnie beztlenowe z rodzaju Proteus;

-pałeczki i laseczki Gram-dodatnie, tlenowe z rodzajów: Bacillus, Erysipelotrix i Corynebacterium; beztlenowe z rodzaju Clostridium, oraz względnie beztlenowe z rodzaju Listeria.

W diagnostyce chorób aerogennych dużą rolę odgrywa sposób hemolizy krwinek w^rokół kolonii na podłożu z krwią. Wyróżnić można następujące typy hemolizy:

-    hemolizę /? - wokół kolonii występuje jasna, ostro odgraniczona strefa rozpuszczonych krwinek o szerokości 2-4 mm;

-    hemoliza a - wokół kolonii powstaje strefa zielonkawa, brunatna lub żółtawa, w której krwinki są częściowo rozpuszczone. Często kolonia ma barwę zielonkawą, o tej samej barwie jest strefa bezpośrednio przylegająca do kolonii, a dalej strefa jest jaśniejsza, z większą ilością rozpuszczonych krwinek;

-    hemoliza a₁ - wyglądem jest zbliżona do hemolizy /?, przy czym strefa rozpuszczenia krwinek nie jest ostra. Podczas obserwacji brzegu kolonii pod lupą lub mikroskopem stwierdza się obecność nie rozpuszczonych krwinek w strefie przejaśnienia pożywki.

W celu oznaczenia liczby bakterii hemolizujących należy:

-    pobrać próbki powietrza ww. metodami na podłoże agarowe z krwią;

-    inkubację hodowli prowadzić w temp. 37°C w ciągu 48 h. Inkubację beztlenową bakterii hemolizujących prowadzić w mieszaninie gazów obojętnych (20% C0₂ i 80% N₂);

-    po okresie inkubacji policzyć kolonie bakterii zdolnych do przeprowadzenia hemolizy pi a;

-    w razie konieczności określenia rodzaju bakterii hemolizujących należy z materiału pobranego z kolonii wykonać obserwacje morfologiczne, określając kształt komórki i sposób zabarwiania metodą Grama.

107