img246

Wykonanie ćwiczenia

Analiza mikrobiologiczna paszy

•    Materiały: pasza.

•    Aparatura i szkło: waga, moździerz, płytki Petriego, pipety, szkiełka przedmiotowe, szkiełka nakrywkowe.

•    Sprzęt: eza bakteriologiczna.

•    Odczynniki: kolba Erlenmeyera z 180 cm³ płynu fizjologicznego, probówki z 9 cm³ płynu fizjologicznego, parafina, roztwór fioletu krystalicznego, fuksyna fenolowa, płyn Lugola, alkohol etylowy.

•    Pożywki: agar odżywczy, pożywka Wrzoska lub podłoże Schaedlera (Difco), pożywka Wilson-Blaira, agar wodny, agar peptonowo-glukozowy z różem bengalskim wg Martina z dodatkiem antybiotyków lub podłoże Sabourauda.

•    Wykonanie:

1.    Pobór i przygotowanie prób:

-pobrać próbki do jałowych szklanych słoików zamykanych hermetycznie. Opatrzyć etykietą z datą i miejscem poboru próby. Przechowywać w suchym i zaciemnionym miejscu przez okres nie dłuższy niż 60 dni, licząc od chwili pobrania;

-homogenizacja próbek - odważyć 20 g paszy do jałowego moździerza. Próbki pasz nie rozdrobnionych lub uformowanych (ziarno, granulat) należy uprzednio rozdrobnić w młynku. Do tak przygotowanych odwa-żek dodać 9-krotną ilość płynu do rozcieńczeń. Rozcieranie próbki w jałowym moździerzu należy prowadzić pod przykryciem z gazy, dodając rozcieńczalnika porcjami po ok. 5 cm³;

-    przygotowanie rozcieńczeń - po utarciu w moździerzu badaną próbę pozostawić na 15 min w celu oddzielenia się warstwy płynnej. W ten sposób otrzymuje się rozcieńczenie 10^-1. Z niego należy wykonać kolejne rozcieńczenia (10^-2, 10~³ itd.), wykonane według schematu (rys. 11.3).

2.    Oznaczanie ogólnej liczby bakterii tlenowych mezofilnych:

-    wykonać posiew metodą płytek lanych (rozdz. 9) po 1 cm³ zawiesiny z każdego przygotowanego rozcieńczenia do dwóch równoległych płytek;

-    rozpuścić podłoże - agar odżywczy, schłodzić do temp. ok. 45°C, zalać płytki z badanym materiałem, pozostawić do zestalenia;

-    odwrócić płytki dnem do góry i inkubować w temp. 37°C przez 48 h;

-    odczyt wyników - po inkubacji policzyć wyrosłe kolonie, uwzględniając rozcieńczenie, podać wynik w 1 g paszy.

3.    Wykrywanie obecności beztlenowych laseczek przetrwalnikujących:

-    w celu wykonania tego oznaczenia należy przeprowadzić namnaża-nie określonej masy próbki i jej rozcieńczeń na pożywce płynnej Wrzoska, a następnie wykonać przesiew na podłoże agarowe w celu wyizolowania typowych kolonii;

-    badany materiał posiać po 1 cm³ zawiesiny z każdego przygotowanego rozcieńczenia do dwóch równoległych probówek z pożywką Wrzoska.

171