Markery genetyczne i ich wykorzystanie w hodowli zwierząt (3)

PSS - identyfikacja przyczyny

>    Mutacją odpowiedzialną bezpośrednio za wystąpienie objawów PSS okazała się substytucja COT w pozycji 1843 genu receptora rianodyny (RYR1). Należy ona do grupy mutacji zmiany sensu i powoduje zamianę ArgoCys w pozycji 615 łańcucha polipeptydowego. Konsekwencją tej zamiany jest upośledzenie funkcji receptora rianodyny - białka zaangażowanego w transport jonów Ca²* w mięśniach szkieletowych

>    Sprawcza mutacja może być wykrywana przy użyciu testu molekularnego RFLP

Technika RFLP

>    Technika RFLP polega na restrykcyjnej analizie produktów reakcji PCR

>    Obecność polimorfizmu/mutacji skutkuje utworzeniem lub zanikiem miejsca rozpoznawanego przez dany enzym restrykcyjny o trawiąc DNA (produkt PCR) pozyskany od osobnika z mutacją otrzymujemy fragmenty o innej długości niż w wyniku trawienia DNA (produktu PCR) pochodzącego od osobnika bez mutacji. Powstałe fragmenty rozdzielamy w żelu.

Analiza wyniku w metodzie RFLP.

Od lewej: homozygota niezawierająca miejsca restrykcji, heterozygota, homozygota zawierająca miejsce restrykcji.

Technika RFLP - identyfikacja mutacji w genie RYR1 Sekwencja prawidłowa - trawienie przez enzym restrykcyjny Hhal - produkty trawienia - 524 i 135 pz

5*.....GC

3*.....CG

GC

CG

Sekwencja zawierająca mutację C-T - brak trawienia przez enzym restrykcyjny Hhal - produkt reakcji 659 pz = długość produktu PCR

TGC.

IACG.

CC CT TT

Halotanowa grupa sprzężeniowa w chromosomie 6 świni:

GPI - pozycja genu izomerazy fosfoheksozy RYR1 - pozycja genu receptora rianodyny

H - pozycja genów kodujących antygeny układu grupowego krwi H

P02 - pozycja genu enzymu postalbuminy 2

PGD - pozycja genu dehydrogenazy 6-P-glukagonu

GPI

RYRl (H;ili

3