zdjęcie3063

Badania uzupełniające

Badania te wykonuje się wówczas, gdy na podłożu Endo w badaniach potwierdzających wyrosły tylko kolonie nietypowe. Badania te obejmują następujące oznaczenia: potwierdzenie zdolności wyizolowanego szczepu do fermentacji laktozy z wytworzeniem kwasu i gazu (tzw. fermentacja wtórna laktozy), określenie morfologii bakterii i wyniki barwienia metodą Grama, a także określenie za pomocą testu na oksydazę cytochromową, czy badany szczep jest oksydazo-dodatni czy oksydazoujemny.

-    Z hodowli na podłożu Endo wybrać kilka kolonii nietypowych, oddalonych od siebie, następnie przesiać je na skos agaru odżywczego i dla potwierdzenia zdolności do fermentacji laktozy na podłoże laktozowe ze wskaźnikiem An-drade.

-    Posiewy inkubować w temp. 37°C przez 24-48 godz.

-    Odczytać wynik. Za wynik dodatni na podłożu laktozowym ze wskaźnikiem Andrade przyjmuje się zakwaszenie podłoża objawiające się różowym zabarwieniem pożywki i obecnością gazu w Turkach Durhama Brak tych zmian to wynik ujemny badań uzupełniających.

-    Z 24-godzinnych hodowli na skosach agaru odżywczego wykonać preparaty barwione metodą Grama.

-    Test na obecność oksydazy cytochromowej wykonać z 24-godzinnej hodowli na skosie agarowym. W tym celu na powierzchnię skosu agarowego nanieść kilka kropli odczynnika do wykrywania tego enzymu. Za wynik dodatni testu uznać pojawienie się po upływie 30 do 120 sek intensywnego niebieskiego zabarwienia (jest to spowodowane powstaniem błękitu indofenolowego w obecności tlenu, cytochromu c i oksydazy cytochromowej).

Zabarwienie o słabej intensywności lub pojawienie się go po upływie 2 min należy interpretować jako brak oksydazy cytochromowej.

-    Wyniki zestawić w tabeli X-10 (ewentualnie sprawdzić poprawność odczytu wyników w tabeli X-9).