img002 (2)

tych samych drobnoustrojów w określonym produkcie posługiwać sie zawsze la sama metoda.

METODY BEZPOŚREDNIE (MIKROSKOPOWE)

Metody te polegają na liczeniu drobnoustrojów bezpośrednio pod mikroskopem. W cienkie) warstwie płynu, w znanej objętości i na znanej powierzchni szkiełka liczy sie komórki żywe, martwe i uszkodzone. Wynik uzyskuje się bardzo szybko w porównaniu do innych metod mikrobiologicznych.

Metody mikroskopowe obejmują liczenie drobnoustrojów:

-    za pomocą komór.

-    metodą Breeda.

-    metodą filtrów membranowych.

Komory do bezpośredniego liczenia drobnoustrojów pod mikroskopem sa to zazwyczaj grubości en ne szkiełka przedmiotowe z wgłębieniem o znanej gtębokości i powierzchni podzielonej na kwadraty lub prostokąty. Używane sa komory Thoma, Howarda, BOrkere, Fuchsa-Rosenthala i inne. Różnią się one wymiarami powierzchni. Dane dotyczące powierzchni i głębokości podane sa na komorach. W komorach możliwe jest liczenie tylko większych komórek takich, jak drożdże, zarodniki pieśni i duże komórki bakterii.

Ograniczenia użycia komór wynikają stąd, ze grubość i głębokość komory uniemożliwia stosowanie obiektywów o dużej sile powiększającej.

Powszechnie stosowana jest KOMORA THOMA, zwana tez hemocyto-metrem (ryc. 50). Jest to grube szkiełko przedmiotowe z wgłębieniem o głębokości 0.1 mm podzielonym na 16 dużych kwadratów, z których każdy składy sie z 16 małych kwadracików o boku 0,05 mm. Powierzchnia jednego kwadratu wynosi 1/400 mm², o objętość nad jednym kwadratem 1/4000 mm^r Na siatkę komory nanosi się kroplę zawiesiny drobnoustrojów i przykrywa szkiełkiem nakrywkowym. Pod mikroskopem, stosując obiektyw powiększający 40x tub 60x, liczy sie komórki w 40 lub 80 małych kwadratach (w każdym kwadracie liczba komórek znajdujących się wewnątrz pola plus potowa znajdująca się na liniach) ■ oblicza sie średnią przypadającą na jeden kwadrat. Liczbę komórek w i cm³ badanego płynu oblicza się ze wzoru:

a b -4000 1000

gdzie:

a - Średnia liczba komórek przypadająca na jeden mały kwadrat, b - ewentualne rozcieńczenie zawiesiny.

103

0 0025 mm*

LICZENIE METODA BREEDA

2

Na znanej powierzchni szkiełka przedmiotowego, najczęściej i cm , rozprowadza sie znana objętość zawiesiny (najczęściej 0,01 cm³). Do nanoszenia próby służyć mogą mikropipetki lub kalibrowane ezy. Preparat po utrwaleniu barwi sie * liczy drobnoustroje pod mikroskopem z użyciem obiektywu immersyjnego. Metoda ta pozwala na oznaczenie liczby bakterii w badanym produkcie. Do prawidłowego przeprowadzenia badania przygotowuje sic trzy preparaty z tej samej zawiesiny. W każdym preparacie oblicza sic średnia z 20 pól widzenia, a następnie średnia z trzech preparatów.

Liczbę bakterii w 1 cm¹ oblicza sic ze wzoru:

b

^a' 2

gdzie:    rt r • c

a - średnia liczba bakterii w 1 polu widzenia, b - powierzchnia preparatu,

c - objętość zawiesiny wprowadzonej na szkiełko przedmiotowe, nr² - powierzchnia pola widzenia, promień pola (r) dla danego układu optycznego mierzy się za pomocą mikrometru okularowego.