Inżynieria 3id 459

4

<;ki r\ <

11 Ilość jednostek jHdimcrazy /lit/ wystarczające dla efektywnej amplifikacU w 40 _v 50_#d    ^{Y ach}'

a)    powinno przekraczać 5 U. gdyż polinieraza szybko „zużywa się" w kolejnych cyklach

b)    powinno być wyższe jeśli chcemy uzyskać bardziej wydajną amplifikację Q) powinno wynosić od 0.5-2.5 U

a) powinno dobierać się zależnie od dhigości amplifikowanego produktu

Startery- do reakcji PCR:

(aU w zależności od celu ich długość powinna wynosić od 14-40 nt, a zawartość G+C powinna być G+C w matrycowym DNA

ich końce 5' nic mogą być komplementarne do siebie

c)    ich końce 3 ’ powinny zawierać sekwencje palindromiczne —-

d)    ich długość powinna być większa dla krótszych amplifikowanych fragmentów DNA »■—

\)

13. Multipleksowy PCR:

w trakcie tej reakcji wydajnie powielana jest tylko jedna nić DNA -«•*^r ) stosuje się w niej kilka par starterów«

polega na amplifikacji kilku regionów w czasie jednej reakcji PCR ^ wykorzystuje się go do sekwencjonowania DNA _v

14. Termostabilne polimerazy:    ...    ₂*

polimeraza Tth posiada zdolność odwrotnej transkrypcji w obecności jonów Mn‘

b)    polimeraza Pfu ma bardzo wysoką procesywność, ale wysoką częstość wstawianych b

c)    polimeraza Deep Vent ma bardzo wysoką procesywność i bardzo wysoką oporność te polimeraza Pfu podobnie jak polimeraza Deep Yent posiada aktywność korektorską

^{,c 17}-----

•«/ b/ińr-p S’ DNA to: