Schowek03

4.2. 1'utggenizacjs spor Aspergillus niger

a)    Przygotowanie zawiesiny spor Aspergillus niger

Spory A, niger ze skosu agarowego zmyć wodą destylowaną (10 ml) 2 dodatkiem 0,0255o Tweenu 20, Zawiesinę spor rozcieńczyć tek, by uzyskać ich stężenie równe 7,5’10^/ml (odpowiada to absorbancji 0,15 przy dłJgości fali 650 nra) i pozostawić w temperaturze pokojowej w ciągu 5 godzin. VI takich warunkach spory

%

napęcznieją i będą podatniejsze na działanie czynnika mutagennego.

b)    Naświetlanie' spor promieniami UV

5. Analiza wyników

/*—

i

p.1. Analiza danych uzyskanych w wyniku mutegenizacji Bacillus sp.

a) Określić przeżywalność komórek w zależności od czasu naświetla-nia promieniąroi UV (t)_t W tym celu należy obliczyć wartość log jp gdzie

O

N - miano komórek po naświetlaniu w czasie t

i

N_q- miano komórek nienaświetlonych.

Miano komórek określić dokonując obliczeń ilości kolonii wyrosłych na płytkach przy uwzględnieniu rozcieńczenia zawiesiny. VI oparciu

Dwie próby po 5 ml zawiesiny spor przenieść sterylnie na płytkę Petri’ego o średnicy 5 cm, ustawić pod lampą UV w odległości 15 cm od źródła promieniowania i'naświetlać spory w ciągu 10 i 15 min.

c) V/ celu określenia prze żywa ln oś ci spor dokonać następujących-wysiewów na płytki Petri^łego z podłożem M;

-    zawiesiny przed mutagenizacją z 100cOkrotnego rozcieńczenia

(1 ml zawiesiny •? 100 ml MgSO^    ml zawiesiny -.>100 ml MgSO^)

-    zawiesiny po mutagenizacji ze 100-krotnego rozcieńczenia (1 ml zawiesiny ^ 100 ml MgSO^).

Z każdej z prób dokonać wysiewu, na 4 płytki w ilości 0,2 ml.

Płytki wstawić do termostatu (50°C, 5 dni).

o te .dane sporządzić wykres:

czas naświetlania (t) min.

b) Częstość pojawiania się mutantów streptomycynoopomych (f) w zależności od czasu naświetlania (t) obliczyć ze wzoru;

f « -jp gdzie; .

WAGI!

-    Lampę UV włączyć 20 min. przed doświadczeniem.

-    W czasie naśv/ietlania zawartość płytek łagodnie mieszać przy użyciu mieszadełka magnetycznego.

-    Od momentu naświetlania płytek promieniami UV chronić próby

przed światłem dziennym.

*

-    Podczas naświetlania nosić okulary zabezpieczające przed działaniem promieni UV.

M - miano mutantów w podłożu ze streptomycyną N - miano komórek po naświetlaniu w czasie t.‘

W oparciu o'obliczone wielkości sporządzić wykres.

f

T

czas naświetlania (t)